| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-24页 |
| 1.1 立题背景及目的 | 第10-11页 |
| 1.2 沙门氏菌简介 | 第11-14页 |
| 1.2.1 沙门氏菌的生物学特征 | 第11-12页 |
| 1.2.2 沙门氏菌抗原的结构、血清型 | 第12-13页 |
| 1.2.3 沙门氏菌的毒力因子 | 第13-14页 |
| 1.2.4 沙门氏菌的流行病学特征 | 第14页 |
| 1.3 沙门氏菌检测方法及研究现状 | 第14-17页 |
| 1.3.1 传统的检测方法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 以免疫学为基础的检测方法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 以分子生物学为基础的检测方法 | 第16-17页 |
| 1.4 实时荧光环介导等温扩增（LAMP）技术 | 第17-23页 |
| 1.4.1 实时荧光 LAMP 法的概述 | 第17页 |
| 1.4.2 实时荧光 LAMP 法的特点 | 第17页 |
| 1.4.3 实时荧光 LAMP 法的引物设计 | 第17-19页 |
| 1.4.4 实时荧光 LAMP 法的基本原理 | 第19-22页 |
| 1.4.5 检测实时荧光 LAMP 反应产物的方法 | 第22页 |
| 1.4.6 实时荧光 LAMP 法的应用 | 第22-23页 |
| 1.5 研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-33页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.1 试验所用菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.1.3 试验中用到的主要培养基 | 第25页 |
| 2.1.4 样品与生化试剂 | 第25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-26页 |
| 2.2.1 培养菌种 | 第25页 |
| 2.2.2 提取细菌的模板 DNA | 第25-26页 |
| 2.3 引物设计、体系和程序的操作 | 第26-27页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.3.2 实时荧光 LAMP 反应体系 | 第27页 |
| 2.4 实时荧光 LAMP 反应体系的优化 | 第27-28页 |
| 2.4.1 优化体系中 Mg2+的添加量 | 第27页 |
| 2.4.2 体系中 dNTPs 添加量的优化 | 第27-28页 |
| 2.4.3 优化体系反应的温度 | 第28页 |
| 2.4.4 体系中 Bst 酶添加量的优化 | 第28页 |
| 2.4.5 体系中甜菜碱添加量的优化 | 第28页 |
| 2.4.6 体系中模板 DNA 添加量的优化 | 第28页 |
| 2.4.7 体系中引物间比例的优化 | 第28页 |
| 2.5 实时荧光 LAMP 引物特异性的检测 | 第28-29页 |
| 2.5.1 检测实时荧光 LAMP 引物的特异性 | 第28页 |
| 2.5.2 检测 PCR 引物的特异性 | 第28-29页 |
| 2.6 实时荧光 LAMP 扩增产物酶切结果分析 | 第29页 |
| 2.7 沙门氏菌纯培养的灵敏度检测 | 第29页 |
| 2.7.1 实时荧光 LAMP 反应的灵敏度检测 | 第29页 |
| 2.7.2 PCR 反应的灵敏度检测 | 第29页 |
| 2.8 提取肉及肉制品中沙门氏菌基因组 DNA 的方法比较 | 第29-31页 |
| 2.8.1 普通热裂解提取方法 | 第29-30页 |
| 2.8.2 Proteinase K 提取法 | 第30页 |
| 2.8.3 试剂盒提取法 | 第30-31页 |
| 2.8.4 FDA 法 | 第31页 |
| 2.8.5 FTA 滤膜法 | 第31页 |
| 2.9 人工污染鲜肉中沙门氏菌的检出限 | 第31-33页 |
| 2.9.1 人工污染鲜肉中沙门氏菌及基因组 DNA 的制备 | 第31页 |
| 2.9.2 实时荧光 LAMP 法检测人工污染肉品中沙门氏菌的检出限 | 第31-32页 |
| 2.9.3 PCR 法检测人工污染沙门氏菌样品的检出限 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-46页 |
| 3.1 实时荧光 LAMP 体系中组分的优化 | 第33-39页 |
| 3.1.1 体系中 Mg2+添加量的优化 | 第33页 |
| 3.1.2 体系中 dNTPs 添加量的优化 | 第33-34页 |
| 3.1.3 反应温度的优化 | 第34-37页 |
| 3.1.4 Bst 酶添加量的优化 | 第37-38页 |
| 3.1.5 甜菜碱添加量的优化 | 第38页 |
| 3.1.6 模板 DNA 添加量的优化 | 第38-39页 |
| 3.1.7 引物间比例对实时荧光 LAMP 反应的影响 | 第39页 |
| 3.2 引物特异性的研究 | 第39-41页 |
| 3.2.1 实时荧光 LAMP 引物特异性的研究 | 第39-41页 |
| 3.2.2 PCR 法引物特异性研究 | 第41页 |
| 3.3 实时荧光 LAMP 扩增产物酶切结果分析 | 第41-42页 |
| 3.4 沙门氏菌纯培养灵敏度的研究 | 第42-43页 |
| 3.4.1 实时荧光 LAMP 检测沙门氏菌的灵敏度 | 第42-43页 |
| 3.4.2 PCR 检测沙门氏菌的灵敏度 | 第43页 |
| 3.5 肉及肉制品中沙门氏菌 DNA 提取方法比较 | 第43-44页 |
| 3.6 人工污染肉中沙门氏菌的检出限 | 第44-46页 |
| 3.6.1 实时荧光 LAMP 检测人工污染肉中沙门氏菌的检出限 | 第44-45页 |
| 3.6.2 PCR 检测人工污染肉中沙门氏菌的检出限 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1 对实时荧光环介导等温扩增技术检测沙门氏菌的评价 | 第46页 |
| 4.2 选择目标基因 | 第46页 |
| 4.3 引物的确定 | 第46页 |
| 4.4 实时荧光 LAMP 体系优化 | 第46-47页 |
| 4.5 污染防控 | 第47页 |
| 4.6 进一步开展实时荧光 LAMP 方法深入研究的建议 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 作者简介 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
