| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第14-20页 |
| 1.1 合成生物学 | 第14页 |
| 1.2 芳香族化合物 | 第14-16页 |
| 1.2.1 芳香族化合物的合成途径 | 第14-15页 |
| 1.2.2 莽草酸途径 | 第15-16页 |
| 1.2.3 芳香族化合物的降解途径 | 第16页 |
| 1.3 苯酚的用途及生产方法 | 第16-17页 |
| 1.4 戊烯二酸的用途及生产方法 | 第17-18页 |
| 1.5 立题的目的及意义 | 第18页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 常规实验方法 | 第20-30页 |
| 2.1 仪器 | 第20页 |
| 2.2 试剂 | 第20页 |
| 2.3 培养基 | 第20页 |
| 2.4 质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.5 PCR | 第21-22页 |
| 2.5.1 克隆PCR | 第21-22页 |
| 2.5.2 验证PCR | 第22页 |
| 2.6 酶切 | 第22-23页 |
| 2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.8 连接 | 第23-24页 |
| 2.9 转化 | 第24页 |
| 2.9.1 化学转化 | 第24页 |
| 2.9.2 电转 | 第24页 |
| 2.10 感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.10.1 化学法制备感受态细胞 | 第24-25页 |
| 2.10.2 电转法制备感受态细胞 | 第25页 |
| 2.11 His标签蛋白的表达和纯化 | 第25-26页 |
| 2.11.1 目的蛋白表达 | 第25页 |
| 2.11.2 细胞破碎 | 第25页 |
| 2.11.3 蛋白纯化 | 第25-26页 |
| 2.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.13 蛋白浓度的测定 | 第26-28页 |
| 2.14 OD600测定细胞浓度 | 第28页 |
| 2.15 RED重组技术对基因进行整合 | 第28-30页 |
| 第三章 莽草酸途径衍生的苯酚生物合成 | 第30-46页 |
| 3.1 引言 | 第30-31页 |
| 3.2 实验材料 | 第31-33页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第31页 |
| 3.2.2 实验质粒 | 第31-33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33-40页 |
| 3.3.1 质粒的构建 | 第33-36页 |
| 3.3.2 BDC体外酶活性分析 | 第36-37页 |
| 3.3.3 HPLC分析 | 第37-38页 |
| 3.3.4 苯酚的体外添加实验 | 第38页 |
| 3.3.5 苯酚的从头合成实验 | 第38页 |
| 3.3.6 模块优化实验 | 第38-39页 |
| 3.3.7 发酵菌株优化 | 第39页 |
| 3.3.8 发酵条件优化实验 | 第39-40页 |
| 3.4 实验结果 | 第40-44页 |
| 3.4.1 转化水杨酸生产苯酚 | 第40-41页 |
| 3.4.2 微生物法从头合成苯酚 | 第41页 |
| 3.4.3 模块优化结果 | 第41-42页 |
| 3.4.4 发酵菌株优化结果 | 第42-43页 |
| 3.4.5 发酵条件优化 | 第43-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 莽草酸途径衍生的戊烯二酸的生物合成 | 第46-72页 |
| 4.1 引言 | 第46-47页 |
| 4.2 实验材料 | 第47-49页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第47页 |
| 4.2.2 实验质粒 | 第47-49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-66页 |
| 4.3.1 质粒的构建 | 第49-60页 |
| 4.3.2 路径中涉及酶的体外活性分析HPLC分析 | 第60-65页 |
| 4.3.3 HPLC分析 | 第65页 |
| 4.3.4 戊烯二酸的体外添加实验 | 第65页 |
| 4.3.5 戊烯二酸的从头合成实验 | 第65-66页 |
| 4.3.6 发酵菌株优化 | 第66页 |
| 4.3.7 基因整合实验 | 第66页 |
| 4.4 实验结果 | 第66-70页 |
| 4.4.1 转化水杨酸生产戊烯二酸 | 第66-67页 |
| 4.4.2 微生物法从头合成戊烯二酸 | 第67-68页 |
| 4.4.3 发酵菌株优化结果 | 第68-69页 |
| 4.4.4 基因整合结果 | 第69-70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论与展望 | 第72-73页 |
| 5.2 创新点 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第84-86页 |
| 作者和导师简介 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87-88页 |