| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩写说明 | 第10-15页 |
| 1 绪论 | 第15-25页 |
| 1.1 FK520的发现及其开发历程 | 第15页 |
| 1.2 FK520的结构特征 | 第15-17页 |
| 1.3 FK520的生物活性 | 第17-19页 |
| 1.3.1 FK520的免疫抑制活性 | 第17-18页 |
| 1.3.2 FK520的抗真菌活性 | 第18-19页 |
| 1.4 FK520的衍生物 | 第19-21页 |
| 1.4.1 匹美莫司 | 第19-20页 |
| 1.4.2 三乙酰-L-鼠李糖取代的FK520 | 第20页 |
| 1.4.3 吲哚基和芳基咪唑基取代的FK520 | 第20-21页 |
| 1.5 FK520生物合成途径 | 第21-23页 |
| 1.6 FK520的发酵生产现状 | 第23-24页 |
| 1.7 立题依据 | 第24-25页 |
| 2 发酵液中FK520液相分析方法的建立 | 第25-31页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第25页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第25页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.2.1 标准品的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.2 色谱条件 | 第26页 |
| 2.2.3 质谱条件 | 第26页 |
| 2.2.4 发酵液中FK520的提取方法 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-30页 |
| 2.3.1 色谱条件的选择 | 第27页 |
| 2.3.2 绘制标准曲线 | 第27-28页 |
| 2.3.3 样品测定 | 第28-30页 |
| 2.4 本章小结 | 第30-31页 |
| 3 FK520产生菌的诱变育种和培养条件优化 | 第31-47页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第31-33页 |
| 3.1.1 菌种 | 第31-32页 |
| 3.1.2 材料与试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 3.2 培养基及试剂配方 | 第33-34页 |
| 3.2.1 培养基 | 第33页 |
| 3.2.2 试剂 | 第33-34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.3.1 培养方法 | 第34页 |
| 3.3.2 孢子悬液的制备 | 第34页 |
| 3.3.3 菌种选育方法 | 第34-36页 |
| 3.3.4 发酵培养基优化 | 第36-37页 |
| 3.3.5 培养条件优化 | 第37-38页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第38-45页 |
| 3.4.1 诱变育种 | 第38-41页 |
| 3.4.2 发酵培养基的优化 | 第41-43页 |
| 3.4.3 发酵培养条件的优化 | 第43-45页 |
| 3.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 4 在FK520产生菌中整合表达vgb基因 | 第47-63页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第47-49页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第47-49页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第49页 |
| 4.2 菌株、质粒以及引物 | 第49-51页 |
| 4.2.1 菌株 | 第49-50页 |
| 4.2.2 质粒 | 第50页 |
| 4.2.3 引物 | 第50-51页 |
| 4.3 培养基及试剂 | 第51页 |
| 4.3.1 培养基 | 第51页 |
| 4.3.2 试剂 | 第51页 |
| 4.4 实验方法 | 第51-56页 |
| 4.4.1 重组整合型质粒pSET-vgb的构建 | 第51-53页 |
| 4.4.2 工程菌SIPI-FK520-vgb的构建 | 第53页 |
| 4.4.3 vgb基因的表达鉴定 | 第53-55页 |
| 4.4.4 工程菌SIPI-FK520-vgb的发酵罐研究 | 第55-56页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第56-61页 |
| 4.5.1 重组质粒pSET-vgb的构建 | 第56-57页 |
| 4.5.2 工程菌SIPI-FK520-vgb的构建 | 第57-58页 |
| 4.5.3 工程菌中vgb基因的表达鉴定 | 第58-59页 |
| 4.5.4 vgb基因表达产物VHb活性测定 | 第59-60页 |
| 4.5.5 工程菌SIPI-FK520-vgb的发酵罐研究 | 第60-61页 |
| 4.6 本章小结 | 第61-63页 |
| 5 在FK520产生菌中过表达ccr基因 | 第63-71页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第64页 |
| 5.1.1 材料与试剂 | 第64页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第64页 |
| 5.2 菌株、质粒以及引物 | 第64-65页 |
| 5.2.1 菌株 | 第64-65页 |
| 5.2.2 质粒 | 第65页 |
| 5.2.3 引物 | 第65页 |
| 5.3 培养基及试剂配方 | 第65-66页 |
| 5.3.1 培养基 | 第65页 |
| 5.3.2 试剂 | 第65-66页 |
| 5.4 实验方法 | 第66-68页 |
| 5.4.1 委内瑞拉链霉菌基因组的提取 | 第66页 |
| 5.4.2 重组质粒pSET-ccr的构建 | 第66-67页 |
| 5.4.3 工程菌SIPI-FK520-ccr的构建 | 第67页 |
| 5.4.4 工程菌SIPI-FK520-ccr的发酵试验 | 第67-68页 |
| 5.5 结果与讨论 | 第68-70页 |
| 5.5.1 重组质粒pSET-ccr的构建 | 第68页 |
| 5.5.2 工程菌SIPI-FK520-ccr的构建 | 第68-69页 |
| 5.5.3 工程菌SIPI-FK520-ccr的发酵试验 | 第69-70页 |
| 5.6 本章小结 | 第70-71页 |
| 全文总结 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第79-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、专利申请 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 附录 | 第85-89页 |
