| 摘要 | 第7-8页 |
| abstract | 第8页 |
| 英文缩写说明 | 第9-12页 |
| 1 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 A40926介绍 | 第12-16页 |
| 1.1.1 A40926的化学结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2 A40926的生物合成过程研究 | 第13-16页 |
| 1.2 改造生物合成途径以提高A40926产量的研究 | 第16-18页 |
| 1.2.1 从修饰酶基因入手的研究 | 第16页 |
| 1.2.2 从调控基因入手的研究 | 第16-18页 |
| 1.3 基因工程育种 | 第18-20页 |
| 1.3.1 链霉菌基因工程育种的遗传操作系统 | 第18-19页 |
| 1.3.2 基因敲除技术在育种中的应用 | 第19页 |
| 1.3.3 外源基因整合在育种中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 立体依据 | 第20-22页 |
| 2 Nonomuraea sp.菌种遗传操作系统的优化 | 第22-30页 |
| 2.1 材料和仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 材料与试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.4 培养基 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 Nonomuraea sp.A416-B4与接合子对安普拉霉素的耐受性 | 第24页 |
| 2.2.2 突变株Nonomuraea sp.A416-B4与大肠杆菌接合转移条件的优化[19] | 第24-25页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第25-28页 |
| 2.3.1 突变株Nonomuraea sp.A416-B4与接合子对安普拉霉素的耐受考察 | 第25-26页 |
| 2.3.2 突变株Nonomuraea sp.A416-B4菌丝体培养时间对接合转移效率的影响 | 第26页 |
| 2.3.3 所用培养基及覆盖抗生素时间对接合转移效率的影响 | 第26-27页 |
| 2.3.4 敲除质粒同源臂长度对接合转移效率的影响 | 第27-28页 |
| 2.4 本章小结 | 第28-30页 |
| 3 dbv23基因敲除菌株的构建 | 第30-46页 |
| 3.1 试剂与仪器 | 第31-34页 |
| 3.1.1 质粒与菌株 | 第31-32页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第32-33页 |
| 3.1.3 培养基 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 敲除质粒pKdbv23质粒的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.2 转化Nonomuraea sp.A416-B4敲除质粒pKdbv23并筛选同源单交换菌株 | 第35页 |
| 3.2.3 单交换菌株连续传代筛选双交换菌株 | 第35-37页 |
| 3.2.4 野生型菌株与dbv23基因敲除菌株的发酵 | 第37页 |
| 3.2.5 发酵液的高效液相色谱（HPLC）分析 | 第37页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第37-45页 |
| 3.3.1 dbv23敲除质粒pKdbv23的酶切验证 | 第37-38页 |
| 3.3.2 dbv23基因敲除菌株的构建 | 第38-41页 |
| 3.3.3 dbv23基因敲除对A40926生物合成的影响 | 第41-44页 |
| 3.3.4 A416-△dbv23与A416-B4的发酵情况对比 | 第44-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 4 dbv3及dbv4基因整合菌株的构建 | 第46-58页 |
| 4.1 仪器与试剂 | 第47-49页 |
| 4.1.1 质粒与菌株 | 第47-48页 |
| 4.1.2 试剂与仪器 | 第48页 |
| 4.1.3 培养基 | 第48-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.2.1 整合表达质粒pEva-dbv3及pEva-dbv4的构建 | 第49-52页 |
| 4.2.2 转化质粒pEva-dbv3 /pEva-dbv4构建工程菌株 | 第52页 |
| 4.2.3 dbv3 /dbv4整合工程菌株的发酵 | 第52页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第52-56页 |
| 4.3.1 dbv3 /dbv4整合表达质粒的酶切验证 | 第52-53页 |
| 4.3.2 工程菌的发酵情况验证 | 第53-55页 |
| 4.3.3 A416-△dbv23-dbv3与A416-△dbv23-dbv4发酵条件的考察 | 第55-56页 |
| 4.4 本章小结 | 第56-58页 |
| 全文总结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第64-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、专利申请 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
