| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 菊糖果糖转移酶概述 | 第11-15页 |
| 1.2.1 菊糖果糖转移酶微生物来源及性质 | 第11-13页 |
| 1.2.2 菊糖果糖转移酶结构及催化机制 | 第13-15页 |
| 1.3 调控酶活性的物理化学以及生物学方法 | 第15页 |
| 1.4 超高压生物技术研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4.1 超高压生物技术概念、特点及其发展 | 第15-16页 |
| 1.4.2 超高压生物技术应用 | 第16-17页 |
| 1.5 超高压对酶影响及其可能作用机制 | 第17-21页 |
| 1.5.1 超高压对酶催化能力影响 | 第17-19页 |
| 1.5.2 超高压对酶热稳定性影响 | 第19页 |
| 1.5.3 超高压对酶构象影响 | 第19-20页 |
| 1.5.4 超高压作用酶分子机制 | 第20-21页 |
| 1.6 酶结构研究方法 | 第21-25页 |
| 1.6.1 结晶衍射法 | 第21-23页 |
| 1.6.2 光谱技术 | 第23-24页 |
| 1.6.3 分子动力学模拟 | 第24-25页 |
| 1.7 本课题立题依据、研究意义及主要研究内容 | 第25-27页 |
| 1.7.1 立题依据和研究意义 | 第25页 |
| 1.7.2 本论文研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 IFTase晶体结构 | 第27-43页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料与方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第27页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第27页 |
| 2.2.3 IFTase制备及分离纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.4 蛋白纯度鉴定 | 第28页 |
| 2.2.5 蛋白浓度确定 | 第28-29页 |
| 2.2.6 酶活测定 | 第29页 |
| 2.2.7 结晶方法 | 第29页 |
| 2.2.8 X-衍射晶体数据收集及结构解析与模型修正 | 第29页 |
| 2.2.9 定点突变 | 第29-30页 |
| 2.2.10 IFTase及突变体热稳定性检测 | 第30页 |
| 2.2.11 数据处理 | 第30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-41页 |
| 2.3.1 IFTase制备与分离纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.2 结晶条件筛选以及衍射数据收集 | 第31-33页 |
| 2.3.3 IFTase及IFTase-GF4复合物结构分析 | 第33-37页 |
| 2.3.4 讨论 | 第37-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 超高压下IFTase的活性和构象 | 第43-62页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第44页 |
| 3.2.3 超高压处理IFTase溶液 | 第44页 |
| 3.2.4 不同温度处理IFTase溶液 | 第44页 |
| 3.2.5 盐酸胍处理IFTase溶液 | 第44页 |
| 3.2.6 酶活测定 | 第44页 |
| 3.2.7 SDS-PAGE | 第44页 |
| 3.2.8 圆二色谱（CD） | 第44-45页 |
| 3.2.9 内源荧光 | 第45页 |
| 3.2.10 表面疏水性 | 第45页 |
| 3.2.11 体积排阻色谱 | 第45-46页 |
| 3.2.12 粒径分析 | 第46页 |
| 3.2.13 原子力显微镜（AFM） | 第46页 |
| 3.2.14 LC-MS | 第46页 |
| 3.2.15 分子动力学模拟 | 第46-47页 |
| 3.2.16 数据处理 | 第47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-61页 |
| 3.3.1 超高压处理对IFTase酶活影响 | 第47-49页 |
| 3.3.2 超高压处理对IFTase构象影响 | 第49-58页 |
| 3.3.3 压力处理、温度处理、变性剂处理后IFTase构象比较 | 第58-61页 |
| 3.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 山梨糖醇对IFTase高压稳定性的调节 | 第62-69页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 材料与方法 | 第62-63页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第62页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第62页 |
| 4.2.3 IFTase-糖/糖醇复合物制备 | 第62-63页 |
| 4.2.4 超高压处理方法 | 第63页 |
| 4.2.5 酶活测定 | 第63页 |
| 4.2.6 粘度测定 | 第63页 |
| 4.2.7 水分活度确定 | 第63页 |
| 4.2.8 圆二色谱 | 第63页 |
| 4.2.9 内源荧光 | 第63页 |
| 4.2.10 紫外吸收光谱 | 第63页 |
| 4.2.11 数据处理 | 第63页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第63-68页 |
| 4.3.1 不同种类糖及浓度对IFTase压力稳定性影响 | 第63-64页 |
| 4.3.2 山梨糖醇对IFTase构象稳定作用 | 第64-66页 |
| 4.3.3 可能机制分析 | 第66-68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 超高压下IFTase的热稳定性 | 第69-79页 |
| 5.1 引言 | 第69页 |
| 5.2 材料与方法 | 第69-71页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第69页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第69-70页 |
| 5.2.3 高压高温处理IFTase | 第70页 |
| 5.2.4 超高压下热失活及热失活动力学 | 第70页 |
| 5.2.5 IFTase酶活测定 | 第70页 |
| 5.2.6 圆二色谱 | 第70页 |
| 5.2.7 内源荧光 | 第70页 |
| 5.2.8 原子力显微镜 | 第70页 |
| 5.2.9 体积排阻色谱 | 第70页 |
| 5.2.10 二硫键含量测定 | 第70-71页 |
| 5.2.11 SDS-PAGE | 第71页 |
| 5.2.12 β-巯基乙醇对IFTase影响 | 第71页 |
| 5.2.13 数据处理 | 第71页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第71-78页 |
| 5.3.1 超高压提高IFTase热稳定性作用 | 第71-73页 |
| 5.3.2 超高压处理后IFTase构象分析 | 第73-76页 |
| 5.3.3 讨论：分子机制 | 第76-78页 |
| 5.4 本章小结 | 第78-79页 |
| 第六章 超高压下IFTase的催化反应 | 第79-90页 |
| 6.1 引言 | 第79页 |
| 6.2 材料与方法 | 第79-81页 |
| 6.2.1 主要试剂 | 第79页 |
| 6.2.2 主要仪器 | 第79页 |
| 6.2.3 压力对IFTase催化反应影响 | 第79页 |
| 6.2.4 超高压下IFTase最适反应温度的确定 | 第79-80页 |
| 6.2.5 超高压下IFTase最适反应pH的确定 | 第80页 |
| 6.2.6 超高压下金属离子对IFTase催化反应的影响 | 第80页 |
| 6.2.7 在超高压下无机盐对IFTase催化反应的影响 | 第80页 |
| 6.2.8 超高压下IFTase催化动力学及热动力学参数计算 | 第80-81页 |
| 6.2.9 DFAIII含量的确定及催化反应速度的计算 | 第81页 |
| 6.2.10 数据处理 | 第81页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第81-89页 |
| 6.3.1 超高压下对IFTase催化反应速度的影响 | 第81-82页 |
| 6.3.2 超高压下IFTase催化反应最适温度的变化 | 第82-83页 |
| 6.3.3 超高压下IFTase催化反应最适pH的变化 | 第83页 |
| 6.3.4 超高压下金属离子对IFTase催化反应的影响 | 第83-84页 |
| 6.3.5 超高压下无机盐对IFTase催化反应的影响 | 第84-85页 |
| 6.3.6 在超高压下IFTase催化反应热动力学参数变化 | 第85-89页 |
| 6.4 本章小结 | 第89-90页 |
| 主要结论与展望 | 第90-92页 |
| 主要结论 | 第90页 |
| 展望 | 第90-92页 |
| 论文创新点 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第103页 |
