| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·胆汁与胆汁酸 | 第7-8页 |
| ·胆盐的形成与代谢 | 第8页 |
| ·胆盐水解酶简介 | 第8-11页 |
| ·胆盐水解酶的作用 | 第8-9页 |
| ·胆盐水解酶的来源 | 第9-10页 |
| ·胆盐水解酶的活性位点 | 第10-11页 |
| ·胆盐水解酶国内外研究现状 | 第11-13页 |
| ·益生菌降胆固醇作用的研究 | 第11页 |
| ·胆盐水解酶基因的克隆和表达 | 第11-12页 |
| ·胆盐水解酶的分离纯化 | 第12页 |
| ·胆盐水解酶的底物特异性 | 第12-13页 |
| ·胆盐水解酶的 3-D结构 | 第13页 |
| ·立题依据与意义 | 第13-14页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| ·主要实验仪器设备与试剂 | 第15-16页 |
| ·主要实验仪器 | 第15页 |
| ·实验所用主要试剂 | 第15-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-23页 |
| ·表达载体的构建 | 第17页 |
| ·质粒提取方法 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第18页 |
| ·转化及重组子的筛选 | 第18页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第18页 |
| ·重组胆盐水解酶酶活的测定方法 | 第18页 |
| ·重组胆盐水解酶SDS-PAGE检测 | 第18-19页 |
| ·蛋白浓度测定方法 | 第19页 |
| ·重组胆盐水解酶的纯化 | 第19页 |
| ·重组胆盐水解酶酶学性质的测定 | 第19页 |
| ·重组胆盐水解酶反应动力学参数的测定 | 第19-20页 |
| ·重组胆盐水解酶晶体结构模拟和预测 | 第20页 |
| ·突变质粒的构建与转化 | 第20-21页 |
| ·突变质粒的转化与重组子的筛选 | 第21页 |
| ·突变菌株产胆盐水解酶的诱导表达 | 第21页 |
| ·突变菌株产胆盐水解酶的纯化 | 第21-22页 |
| ·突变菌株所产胆盐水解酶酶学性质测定 | 第22页 |
| ·突变菌株所产胆盐水解酶动力学参数测定 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-38页 |
| ·胆盐水解酶基因克隆与表达 | 第23-29页 |
| ·基因克隆与载体构建 | 第23-24页 |
| ·表达产物的鉴定与纯化 | 第24-26页 |
| ·重组胆盐水解酶表达条件优化 | 第26-29页 |
| ·重组胆盐水解酶酶学性质 | 第29-34页 |
| ·温度对重组胆盐水解酶活性的影响 | 第29-30页 |
| ·pH对重组胆盐水解酶活性的影响 | 第30-31页 |
| ·重组胆盐水解酶底物特异性 | 第31-32页 |
| ·金属离子对重组胆盐水解酶酶活的影响 | 第32-33页 |
| ·重组胆盐水解酶动力学性质 | 第33-34页 |
| ·重组胆盐水解酶分子改造 | 第34-38页 |
| ·胆盐水解酶分子结构 3-D模拟 | 第34-35页 |
| ·胆盐水解酶基因的同源性分析 | 第35页 |
| ·E60 位点饱和突变改变重组胆盐水解酶底物特异性 | 第35-36页 |
| ·突变体的底物特异性分析 | 第36页 |
| ·突变体的酶学参数分析 | 第36-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38页 |
| 展望 | 第38-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文和专利 | 第44页 |