| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·凝乳酶的概述 | 第8-11页 |
| ·凝乳酶的应用 | 第8页 |
| ·凝乳酶的作用机理 | 第8-9页 |
| ·凝乳酶的结构 | 第9页 |
| ·凝乳酶的来源 | 第9-11页 |
| ·微生物凝乳酶的研究现状 | 第11-13页 |
| ·产酶菌种选育 | 第11-12页 |
| ·酶功能及应用研究 | 第12页 |
| ·基因工程凝乳酶 | 第12-13页 |
| ·原核表达系统介绍 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第13-14页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第14页 |
| ·课题来源 | 第14页 |
| ·研究意义与研究内容 | 第14-16页 |
| ·研究意义 | 第14-15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-24页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·溶液的配制 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-24页 |
| ·B. amyloliquefaciens JNU002 染色体的提取 | 第18页 |
| ·凝乳酶基因的克隆 | 第18-19页 |
| ·感受态细胞的制备方法 | 第19页 |
| ·重组质粒的小量快速提取 | 第19-20页 |
| ·重组大肠杆菌构建方法 | 第20页 |
| ·重组酶的诱导表达及鉴定 | 第20-21页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌的构建及表达 | 第21页 |
| ·常用分子生物实验操作 | 第21页 |
| ·重组大肠杆菌诱导条件优化方法 | 第21-22页 |
| ·重组凝乳酶的纯化 | 第22页 |
| ·重组酶的酶学性质研究 | 第22-23页 |
| ·酶活力及蛋白含量的测定方法 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-40页 |
| ·凝乳酶基因MCEamy的克隆 | 第24-27页 |
| ·B. amyloliquefaciens JNU002 凝乳酶的鉴定 | 第24-25页 |
| ·凝乳酶基因MCEamy的PCR扩增 | 第25页 |
| ·PCR扩增片段MCEamy的基因测序 | 第25页 |
| ·MCEamy在大肠杆菌中的重组表达验证 | 第25-27页 |
| ·凝乳酶基因序列proMCE的表达验证 | 第27-30页 |
| ·凝乳酶基因proMCE的克隆 | 第27-28页 |
| ·凝乳酶基因proMCE的表达验证 | 第28-29页 |
| ·重组凝乳酶基因功能鉴定分析 | 第29-30页 |
| ·凝乳酶在枯草芽孢杆菌中的重组表达 | 第30-33页 |
| ·重组表达载体pMA5-cMCE的构建 | 第31-32页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌的表达 | 第32-33页 |
| ·重组大肠杆菌诱导条件的优化 | 第33-35页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线的测定 | 第33页 |
| ·最适诱导时机的确定 | 第33-34页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第34页 |
| ·最佳诱导诱导剂浓度的确定 | 第34页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第34-35页 |
| ·重组凝乳酶的纯化与酶学性质研究 | 第35-40页 |
| ·重组凝乳酶的纯化 | 第35-36页 |
| ·重组凝乳酶的酶学性质研究 | 第36-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-42页 |
| 主要结论 | 第40页 |
| 展望 | 第40-42页 |
| 致谢 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49-50页 |
| 附录A: B. amyloliquefaciens JNU002 凝乳酶基因序列 | 第50页 |
