| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 1 红曲霉研究 | 第15-22页 |
| ·红曲霉的重要代谢产物 | 第15-19页 |
| ·红曲色素 | 第15-17页 |
| ·莫呐可啉K | 第17-18页 |
| ·γ-氨基丁酸 | 第18页 |
| ·其它代谢产物 | 第18-19页 |
| ·红曲霉的分子生物学研究 | 第19-22页 |
| ·红曲霉的分类 | 第19-20页 |
| ·红曲霉基因文库的构建 | 第20页 |
| ·红曲霉遗传转化方法的研究 | 第20-21页 |
| ·红曲霉功能基因的研究 | 第21-22页 |
| 2 真菌功能基因的研究方法及其应用 | 第22-33页 |
| ·基因、基因组与功能基因组学 | 第22-23页 |
| ·基因的功能及其研究内容 | 第23页 |
| ·基因功能的研究策略 | 第23-24页 |
| ·正向遗传学策略 | 第23-24页 |
| ·反向遗传学策略 | 第24页 |
| ·基因功能的研究方法 | 第24-31页 |
| ·理化诱变方法 | 第24页 |
| ·限制性内切酶介导的整合技术 | 第24-25页 |
| ·转座子标签技术 | 第25页 |
| ·原生质体转化 | 第25-26页 |
| ·基因敲除 | 第26页 |
| ·RNA干涉 | 第26-27页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转化技术 | 第27-31页 |
| ·其它方法 | 第31-33页 |
| ·生物信息学在研究基因功能中的应用 | 第31页 |
| ·表达序列标签 | 第31-32页 |
| ·基因表达连续分析法 | 第32页 |
| ·表达谱基因芯片 | 第32-33页 |
| ·蛋白质组学 | 第33页 |
| ·结语 | 第33页 |
| 3 本课题研究目的意义及主要研究内容 | 第33-35页 |
| ·研究目的与意义 | 第33-34页 |
| ·主要研究内容 | 第34-35页 |
| 第二章 红曲霉T-DNA转化库的构建及色素突变子的性质分析 | 第35-52页 |
| 1 材料 | 第35-38页 |
| ·菌种 | 第35-36页 |
| ·主要仪器设备及试剂 | 第36-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| ·主要试剂及配制方法 | 第36-37页 |
| ·酶及试剂盒 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| ·根癌农杆菌介导T-DNA转化红曲霉的基本步骤 | 第38-39页 |
| ·红曲霉对潮霉素的敏感性实验 | 第38页 |
| ·红曲霉孢子的制备 | 第38页 |
| ·根癌农杆菌的活化及诱导培养 | 第38页 |
| ·红曲霉孢子与根癌农杆菌的共培养 | 第38-39页 |
| ·转化子的筛选 | 第39页 |
| ·转化子的性质研究 | 第39-41页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·Southern杂交鉴定转化子T-DNA拷贝数 | 第40-41页 |
| ·转化子的形态观察 | 第41页 |
| ·转化子的稳定性研究 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-50页 |
| ·农杆菌介导的红曲霉T-DNA转化库的建立 | 第41-42页 |
| ·红曲霉对潮霉素的敏感性实验 | 第41页 |
| ·T-DNA转化库的建立 | 第41-42页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第42页 |
| ·T-DNA拷贝数的Southern杂交分析 | 第42-43页 |
| ·色素突变子的形态观察 | 第43-49页 |
| ·菌落形态观察 | 第43-46页 |
| ·显微结构观察 | 第46-49页 |
| ·色素突变子的遗传稳定性研究 | 第49-50页 |
| 4 小结与讨论 | 第50-52页 |
| ·红曲霉T-DNA转化库的构建 | 第50页 |
| ·红曲霉转化子的分化 | 第50-51页 |
| ·关于遗传稳定性的研究 | 第51-52页 |
| 第三章 色素突变子主要代谢产物的分析测定 | 第52-69页 |
| 1 材料 | 第52-53页 |
| ·菌株 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-56页 |
| ·红曲的制备 | 第53页 |
| ·米饭培养基 | 第53页 |
| ·红曲的制备 | 第53页 |
| ·红曲色素的分析 | 第53-54页 |
| ·色价测定及吸收峰扫描 | 第53页 |
| ·色素成分的薄层色谱分析 | 第53-54页 |
| ·红曲色素组分的紫外-可见分析 | 第54页 |
| ·红曲中monacolin K的测定 | 第54页 |
| ·monacolin K标准曲线 | 第54页 |
| ·红曲中monacolin K的提取及其测定 | 第54页 |
| ·红曲中GABA的测定 | 第54-55页 |
| ·GABA标准曲线 | 第54-55页 |
| ·红曲中GABA的提取及测定 | 第55页 |
| ·红曲中桔霉素的测定 | 第55-56页 |
| ·桔霉素标准曲线 | 第55页 |
| ·红曲中桔霉素的提取及其测定 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-66页 |
| ·红曲色素的分析 | 第56-63页 |
| ·色价及其UV-VIS扫描分析 | 第56-58页 |
| ·红曲色素薄层层析分析 | 第58-63页 |
| ·红曲中monacolin K含量的测定 | 第63-64页 |
| ·红曲米中GABA含量的测定 | 第64页 |
| ·红曲中桔霉素含量的测定 | 第64-66页 |
| 4 小结与讨论 | 第66-69页 |
| ·红曲霉主要代谢关系的研究 | 第66-67页 |
| ·红曲霉形态发育与次生代谢产物的关系 | 第67-69页 |
| 第四章 色素突变子T-DNA位点侧翼序列TAIL-PCR扩增及其扩增片段的功能分析 | 第69-81页 |
| 1 材料 | 第69-70页 |
| ·菌株 | 第69页 |
| ·酶与主要生化试剂 | 第69页 |
| ·培养基 | 第69-70页 |
| 2 方法 | 第70-74页 |
| ·TAIL-PCR扩增T-DNA插入位点侧翼序列 | 第70-73页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第70页 |
| ·TAIL-PCR的循环条件及反应体系 | 第70-72页 |
| ·TAIL-PCR产物纯化 | 第72-73页 |
| ·PCR产物的连接、转化及测序 | 第73-74页 |
| ·连接 | 第73页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第73页 |
| ·转化 | 第73-74页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第74页 |
| ·测序 | 第74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-79页 |
| ·引物的设计 | 第74-76页 |
| ·色素突变子T-DNA插入位点侧翼序列的TAIL-PCR及扩增序列分析 | 第76-79页 |
| ·TAIL-PCR扩增 | 第76-77页 |
| ·扩增产物的测序及其功能分析 | 第77-79页 |
| 4 小结与讨论 | 第79-81页 |
| 第五章 805~#色素突变子T-DNA插入位点侧翼cDNA序列的分离及其功能验证 | 第81-105页 |
| 1 材料 | 第81-83页 |
| ·菌株与质粒 | 第81页 |
| ·主要试剂 | 第81页 |
| ·农杆菌介导的转化所需试剂及培养基 | 第81-82页 |
| ·引物序列 | 第82-83页 |
| ·主要仪器设备 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-91页 |
| ·红色红曲霉M-7总RNA提取 | 第83页 |
| ·3’RACE扩增805~#突变子DNA片段3’末端的cDNA序列 | 第83-85页 |
| ·RT-PCR扩增3’末端第一条cDNA链 | 第83-84页 |
| ·PCR扩增3’末端cDNA双链 | 第84-85页 |
| ·5’RACE扩增805~#DNA片段5’方向的cDNA序列 | 第85-88页 |
| ·5’方向cDNA序列的扩增 | 第85-86页 |
| ·5’末端cDNA序列的扩增 | 第86-88页 |
| ·cDNA片段的拼接及功能分析 | 第88页 |
| ·预测的805~#flbA的RGS编码区的敲除 | 第88-91页 |
| ·对应于cDNA序列的长DNA片段的 PCR扩增 | 第88页 |
| ·重组敲除载体的构建 | 第88-90页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转化红曲霉 | 第90-91页 |
| 3 结果与分析 | 第91-103页 |
| ·对应于805~#DNA片段的全长cDNA的扩增 | 第91-95页 |
| ·805~#DNA片段的3’末端cDNA序列的扩增(3’RACE) | 第91-92页 |
| ·805~#DNA片段的5’RACE扩增 | 第92-95页 |
| ·cDNA序列的拼接与分析 | 第95-99页 |
| ·敲除载体的验证 | 第99-102页 |
| ·目标DNA片段的PCR扩增 | 第99页 |
| ·重组质粒pC805的构建与鉴定 | 第99-100页 |
| ·重组质粒pC805S的构建与鉴定 | 第100-101页 |
| ·含pC805S的农杆菌EHA105的PCR鉴定 | 第101-102页 |
| ·含pC805S的农杆菌EHA105转化红曲霉M-7及转化子的验证 | 第102-103页 |
| ·发生同源重组的转化子的筛选 | 第102-103页 |
| ·发生同源重组的转化子的PCR验证 | 第103页 |
| 4 小结与讨论 | 第103-105页 |
| 第六章 结论与展望 | 第105-107页 |
| 1 结论 | 第105页 |
| 2 展望 | 第105-106页 |
| 3 论文创新点 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 附录1 测序结果 | 第120-125页 |
| 附录2 攻读学位期间发表文章 | 第125页 |
