| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文简称及注解 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 氨基糖苷类抗生素 | 第11-13页 |
| 1.1.1 氨基糖苷类抗生素简介 | 第11页 |
| 1.1.2 氨基糖苷类抗生素生物合成研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2 庆大霉素 | 第13-20页 |
| 1.2.1 小单孢菌简介 | 第13页 |
| 1.2.2 庆大霉素简介 | 第13-14页 |
| 1.2.3 庆大霉素生物合成基因簇 | 第14-16页 |
| 1.2.4 庆大霉素生物合成研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.4.1 庆大霉素Cla代谢支路生物合成 | 第16页 |
| 1.2.4.2 庆大霉素Cl代谢支路生物合成 | 第16-18页 |
| 1.2.5 庆大霉素检测方法研究 | 第18页 |
| 1.2.5.1 薄层层析法(TLC) | 第18页 |
| 1.2.5.2 高效液相色谱法(HPLC) | 第18页 |
| 1.2.5.3 质谱法(MS) | 第18页 |
| 1.2.6 庆大霉素产生菌的选育 | 第18-19页 |
| 1.2.6.1 诱变育种 | 第18-19页 |
| 1.2.6.2 原生质体融合 | 第19页 |
| 1.2.6.3 基因工程 | 第19页 |
| 1.2.7 庆大霉素的工业生产 | 第19-20页 |
| 1.2.8 庆大霉素发酵优化研究及优化方法 | 第20页 |
| 1.2.8.1 单因素实验 | 第20页 |
| 1.2.8.2 Plackett-Burman试验 | 第20页 |
| 1.2.8.3 响应面优化方法 | 第20页 |
| 1.3 选题依据与研究内容 | 第20-22页 |
| 1.3.1 选题依据 | 第20-21页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3.1 主要材料及试剂 | 第24页 |
| 2.1.3.2 常用溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.1.3.3 抗生素 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 菌种培养和保藏 | 第26-27页 |
| 2.2.2 放线菌基因组DNA提取 | 第27页 |
| 2.2.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第27-28页 |
| 2.2.4 核酸电泳 | 第28-29页 |
| 2.2.5 DNA酶切反应 | 第29页 |
| 2.2.6 DNA片段回收 | 第29-30页 |
| 2.2.7 DNA酶连反应 | 第30页 |
| 2.2.8 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.2.9 转化 | 第30页 |
| 2.2.10 质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第30-31页 |
| 2.2.11 小单孢菌-大肠杆菌接合转移 | 第31-32页 |
| 2.2.12 摇瓶发酵 | 第32页 |
| 2.2.13 抗生素生物效价的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.14 小单孢菌次级代谢产物的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.14.1 732阳离子交换树脂的预处理 | 第33页 |
| 2.2.14.2 庆大霉素及中间体的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.15 次级代谢产物分析 | 第34-35页 |
| 2.2.15.1 TLC分析法 | 第34页 |
| 2.2.15.2 质谱法(MS) | 第34-35页 |
| 第三章工程菌GenB102的构建及gmrB基因研究 | 第35-43页 |
| 3.1 生物信息学推测gmrB基因功能 | 第35-36页 |
| 3.2 重组质粒pKBE2的构建 | 第36-39页 |
| 3.2.1 交换臂的扩增 | 第37页 |
| 3.2.2 质粒pKBE2的构建过程 | 第37-39页 |
| 3.3 gmrB基因缺失工程菌的筛选与验证 | 第39-40页 |
| 3.3.1 单交换工程菌的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.2 gmrB基因失活工程菌的筛选 | 第40页 |
| 3.4 工程菌GenB102次级代谢产物分析 | 第40-41页 |
| 3.5 工程菌GenB102敏感性实验 | 第41-42页 |
| 3.6 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 工程菌GenA102的构建及gmrA基因研究 | 第43-53页 |
| 4.1 生物信息学推测gmrA基因功能 | 第43页 |
| 4.2 同源重组质粒pKAE2的获得 | 第43-47页 |
| 4.2.1 交换臂的克隆 | 第45页 |
| 4.2.2 质粒pKAE2的构建过程 | 第45-47页 |
| 4.3 gmrA基因缺失工程菌的筛选与验证 | 第47-49页 |
| 4.3.1 单交换工程菌的获得 | 第47-48页 |
| 4.3.2 gmrA基因失活工程菌的筛选 | 第48-49页 |
| 4.4 工程菌GenA102次级代谢产物分析 | 第49-50页 |
| 4.5 工程菌GenA102耐庆大霉素敏感性试验 | 第50-51页 |
| 4.6 gmrA基因克隆与表达 | 第51-52页 |
| 4.7 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 主产JI-20A工程菌的构建 | 第53-60页 |
| 5.1 生物信息学推测sisI基因功能 | 第53-54页 |
| 5.2 同源重组质粒pKTI2的构建 | 第54-57页 |
| 5.2.1 同源交换臂的扩增 | 第55页 |
| 5.2.2 同源重组质粒pKT12的构建 | 第55-57页 |
| 5.3 基因sisI缺失工程菌的获得 | 第57-58页 |
| 5.3.1 单交换工程菌的鉴定 | 第57页 |
| 5.3.2 sisI基因缺失工程菌的筛选 | 第57-58页 |
| 5.4 级代谢产物分析 | 第58-59页 |
| 5.5 小结 | 第59-60页 |
| 第六章 genP与sisI基因功能同一性研究 | 第60-67页 |
| 6.1 同源重组质粒pKTI4的构建 | 第60-63页 |
| 6.1.1 同源交换臂的扩增 | 第62页 |
| 6.1.2 同源重组质粒pKTI4的构建 | 第62-63页 |
| 6.2 genP基因替换sisI基因工程菌获得 | 第63-65页 |
| 6.2.1 单交换工程菌的鉴定 | 第63-64页 |
| 6.2.2 双交换工程菌的筛选 | 第64-65页 |
| 6.3 工程菌TP1102的次级代谢产物分析 | 第65-66页 |
| 6.4 小结 | 第66-67页 |
| 第七章 GbK 10发酵优化及产业化试验 | 第67-81页 |
| 7.1 实验材料与仪器 | 第67-68页 |
| 7.1.1 菌株 | 第67页 |
| 7.1.2 培养基 | 第67页 |
| 7.1.3 实验试剂 | 第67-68页 |
| 7.1.3.1 标准品 | 第67页 |
| 7.1.3.2 结晶紫染色液 | 第67-68页 |
| 7.1.4 仪器设备 | 第68页 |
| 7.2 试验方法 | 第68-70页 |
| 7.2.1 菌株活化 | 第68页 |
| 7.2.2 Gbk10菌丝的制备及发酵 | 第68页 |
| 7.2.3 菌株复壮 | 第68-69页 |
| 7.2.3.1 孢子悬液制备 | 第68-69页 |
| 7.2.3.2 分离纯化 | 第69页 |
| 7.2.3.3 筛选 | 第69页 |
| 7.2.4 实验设计 | 第69-70页 |
| 7.2.4.1 Plackett-Burman(PB)试验设计 | 第69页 |
| 7.2.4.2 单因素实验 | 第69-70页 |
| 7.2.4.3 响应面试验 | 第70页 |
| 7.3 实验结果与讨论 | 第70-79页 |
| 7.3.1 菌种复壮 | 第70-71页 |
| 7.3.2 种子培养 | 第71-72页 |
| 7.3.2.1 斜面保存时间考察 | 第71页 |
| 7.3.2.2 种龄考察 | 第71-72页 |
| 7.3.3 Plackett-Burman实验 | 第72-73页 |
| 7.3.4 单因素实验 | 第73-75页 |
| 7.3.4.1 玉米淀粉最佳浓度确定 | 第73-74页 |
| 7.3.4.2 黄豆饼粉最佳浓度确定 | 第74-75页 |
| 7.3.4.3 最佳起始pH的确定 | 第75页 |
| 7.3.4.4 转速的确定 | 第75页 |
| 7.3.5 响应面分析 | 第75-79页 |
| 7.3.5.1 多元二次模型方程的建立及检验 | 第76-77页 |
| 7.3.5.2 响应面交互作用与优化 | 第77-78页 |
| 7.3.5.3 回归模型的验证 | 第78-79页 |
| 7.4 产业化实验 | 第79-80页 |
| 7.5 小结 | 第80-81页 |
| 全文总结 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 附录 | 第91-93页 |
| 个人简历 | 第93页 |
