| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 谷胱甘肽的结构,分布与性质 | 第11-12页 |
| 1.1.2 谷胱甘肽生物学功能 | 第12页 |
| 1.1.3 谷胱甘肽的应用现状 | 第12-13页 |
| 1.2 谷胱甘肽的生产 | 第13-20页 |
| 1.2.1 萃取法 | 第13页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第13-14页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第14-18页 |
| 1.2.4 酶法 | 第18-20页 |
| 1.3 酵母的选择标记 | 第20-21页 |
| 1.4 GSH含量的测定 | 第21-22页 |
| 1.4.1 分光光度法 | 第21页 |
| 1.4.2 荧光法 | 第21页 |
| 1.4.3 高效液相色谱法(HPLC) | 第21-22页 |
| 1.5 课题来源与研究意义 | 第22页 |
| 1.5.1 课题来源 | 第22页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第22页 |
| 1.6 本课题研究内容 | 第22-24页 |
| 第2章 酿酒酵母工程菌的构建 | 第24-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-34页 |
| 2.1.1 材料 | 第24-27页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第34-43页 |
| 2.2.1 遗传霉素G418,潮霉素Hyg最低杀伤浓度 | 第34-35页 |
| 2.2.2 GSH1、GSH2、Kan~r、Hyg~r基因的克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.3 酵母菌重组表达质粒的构建 | 第36-39页 |
| 2.2.4 菌落PCR鉴定 | 第39页 |
| 2.2.5 重组质粒的酶切验证 | 第39-40页 |
| 2.2.6 酵母转化子的筛选 | 第40-41页 |
| 2.2.7 重组菌的蛋白表达 | 第41-42页 |
| 2.2.8 重组菌的遗传稳定性 | 第42-43页 |
| 2.3 本章小结 | 第43-44页 |
| 第3章 重组菌的表达及发酵条件的初步研究 | 第44-58页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-47页 |
| 3.1.1 材料 | 第44-46页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第46-47页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第47-57页 |
| 3.2.1 重组菌株的生物量 | 第47-48页 |
| 3.2.2 重组菌株合成谷胱甘肽的测定 | 第48-49页 |
| 3.2.3 重组菌S.TS013/GSH1+GSH2发酵条件的优化 | 第49-52页 |
| 3.2.4 重组菌S.TS013/GSH1+GSH2发酵培养基的优化 | 第52-56页 |
| 3.2.5 正交实验优化培养基 | 第56-57页 |
| 3.3 本章小结 | 第57-58页 |
| 第4章 氨基酸和过氧化氢的添加对谷胱甘肽发酵的影响 | 第58-67页 |
| 4.1 材料与方法 | 第58-60页 |
| 4.1.1 材料 | 第58-59页 |
| 4.1.2 试验方法 | 第59-60页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第60-66页 |
| 4.2.1 不同培养时间菌体的OD值和菌体干重 | 第60-61页 |
| 4.2.2 OD_(600)值与菌体干重的函数关系的测定 | 第61-62页 |
| 4.2.3 氨基酸的添加和H2O2氧应力胁迫的影响 | 第62-66页 |
| 4.3 本章小结 | 第66-67页 |
| 第5章 重组酵母菌酶法催化合成谷胱甘肽的研究 | 第67-74页 |
| 5.1 材料与方法 | 第67-69页 |
| 5.1.1 材料 | 第67-68页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第68-69页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第69-73页 |
| 5.2.1 酵母细胞对GSH的通透性 | 第69-70页 |
| 5.2.2 酶反应体系的组成 | 第70页 |
| 5.2.3 不同菌株GSH合成能力的比较 | 第70-71页 |
| 5.2.4 两个重组菌一步合成GSH | 第71-72页 |
| 5.2.5 两个重组菌两步合成GSH | 第72-73页 |
| 5.3 本章小结 | 第73-74页 |
| 第6章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 6.1 结论 | 第74-75页 |
| 6.2 进一步工作方向 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第83页 |
