| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·内切β-1,4-葡聚糖酶简介 | 第8-12页 |
| ·纤维素酶的酶系组成及协同作用 | 第8页 |
| ·内切β-1,4-葡聚糖酶的分子结构及分类 | 第8-9页 |
| ·内切β-1,4-葡聚糖酶的应用 | 第9-10页 |
| ·内切β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆表达研究现状 | 第10-12页 |
| ·壳寡糖简介 | 第12-14页 |
| ·壳寡糖的应用 | 第12页 |
| ·壳寡糖的制备方法 | 第12-13页 |
| ·壳寡糖的检测方法 | 第13页 |
| ·纤维素酶制备壳寡糖的研究进展 | 第13-14页 |
| ·本课题的立题依据及意义 | 第14-15页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第16-23页 |
| ·菌种与质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·培养方法 | 第17-18页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·培养方法 | 第17-18页 |
| ·分子生物学操作 | 第18-19页 |
| ·T. fusca 总 DNA 的提取 | 第18页 |
| ·cel5A 基因的克隆 | 第18-19页 |
| ·重组表达质粒 pET-24a(+)/pelB-cel5A 的构建 | 第19页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第19页 |
| ·胶回收目的 DNA 片段 | 第19页 |
| ·分析方法 | 第19-21页 |
| ·菌体干重的测定 | 第19-20页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第20页 |
| ·胞外及周质空间中酶液的获取 | 第20页 |
| ·质粒稳定性的测定 | 第20页 |
| ·CMCase 酶活的测定 | 第20页 |
| ·壳聚糖水解活力的测定 | 第20页 |
| ·SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第20页 |
| ·壳聚糖水解产物的质谱检测 | 第20-21页 |
| ·壳聚糖水解产物的高效液相色谱(HPLC-ELSD)检测 | 第21页 |
| ·重组内切β-1,4-葡聚糖酶 Cel5A 的分离纯化 | 第21页 |
| ·重组内切β-1,4-葡聚糖酶 Cel5A 的酶学性质 | 第21-22页 |
| ·最适 pH 及 pH 稳定性 | 第21页 |
| ·最适温度及热稳定性 | 第21页 |
| ·金属离子对重组酶酶活力的影响 | 第21-22页 |
| ·动力学参数的测定 | 第22页 |
| ·表面活性剂对重组酶酶活的影响 | 第22页 |
| ·重组内切β-1,4-葡聚糖酶 Cel5A 水解壳聚糖条件的研究 | 第22-23页 |
| ·底物浓度对水解反应的影响 | 第22页 |
| ·温度对水解反应的影响 | 第22页 |
| ·酶用量对水解反应的影响 | 第22页 |
| ·反应时间对水解反应的影响 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-43页 |
| ·T. fusca Cel5A 在 E. coli BL21(DE3)中的克隆表达 | 第23-26页 |
| ·重组表达质粒 pET-24a(+)/pelB-cel5A 的构建 | 第23-24页 |
| ·重组 Cel5A 在 E. coli BL21(DE3)中的表达 | 第24-26页 |
| ·重组大肠杆菌产 Cel5A 的发酵条件优化 | 第26-33页 |
| ·种龄的确定 | 第26页 |
| ·碳源及其浓度对重组菌产酶的影响 | 第26-28页 |
| ·氮源及其浓度对重组菌产酶的影响 | 第28-29页 |
| ·磷酸盐浓度对重组菌产酶的影响 | 第29页 |
| ·金属离子及其浓度对重组菌产酶的影响 | 第29-30页 |
| ·正交试验 | 第30-31页 |
| ·重组大肠杆菌产 Cel5A 的 3 L 发酵罐小试 | 第31-33页 |
| ·重组 Cel5A 的分离纯化及酶学性质研究 | 第33-38页 |
| ·重组 Cel5A 的分离纯化 | 第33-34页 |
| ·重组 Cel5A 的酶学性质研究 | 第34-38页 |
| ·重组 Cel5A 水解壳聚糖条件的研究 | 第38-43页 |
| ·重组 Cel5A 水解壳聚糖能力分析 | 第38-39页 |
| ·底物浓度的影响 | 第39-40页 |
| ·温度的影响 | 第40页 |
| ·酶用量的影响 | 第40-41页 |
| ·水解时间的影响 | 第41-43页 |
| 第四章 结论与展望 | 第43-44页 |
| ·主要结论 | 第43页 |
| ·展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
