裂殖壶菌LU310的遗传改造及苹果酸对DHA合成的影响机制研究
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1.1 DHA概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 DHA的结构和性质 | 第13页 |
| 1.1.2 DHA的来源 | 第13-16页 |
| 1.2 微生物DHA的合成途径 | 第16-20页 |
| 1.2.1 脂肪酸合成酶(FAS)途径 | 第16-18页 |
| 1.2.2 聚酮合成酶(PKS)途径 | 第18-20页 |
| 1.3 利用基因工程技术改造裂殖壶菌 | 第20-21页 |
| 1.4 外源添加物提高裂殖壶菌DHA发酵产量 | 第21-24页 |
| 1.4.1 添加关键酶的前体物质 | 第21-22页 |
| 1.4.2 添加关键酶的辅因子 | 第22页 |
| 1.4.3 添加阻遏竞争代谢的物质 | 第22-23页 |
| 1.4.4 添加植物激素 | 第23-24页 |
| 1.5 本论文研究的意义及内容 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究的意义及目的 | 第24-25页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 其它溶液的配置 | 第27页 |
| 2.1.4 实验药品、试剂盒及仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.5 引物 | 第28页 |
| 2.2 菌种的保藏与培养 | 第28-29页 |
| 2.2.1 菌种保藏 | 第28页 |
| 2.2.2 菌种培养 | 第28-29页 |
| 2.3 基因工程菌的构建 | 第29-34页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.2 大肠杆菌的热激转化 | 第30页 |
| 2.3.3 质粒的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.4 聚合酶链式反应(PCR) | 第31页 |
| 2.3.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| 2.3.6 基因片段的回收 | 第31-32页 |
| 2.3.7 双酶切反应 | 第32页 |
| 2.3.8 裂殖壶菌基因组的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.9 裂殖壶菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.3.10 裂殖壶菌的电转化 | 第33-34页 |
| 2.4 蛋白质的提取 | 第34-35页 |
| 2.4.1 高压匀浆破碎 | 第34页 |
| 2.4.2 冷激法沉淀蛋白 | 第34页 |
| 2.4.3 蛋白质浓度测定 | 第34-35页 |
| 2.5 分析方法 | 第35-43页 |
| 2.5.1 生物量测定 | 第35页 |
| 2.5.2 总油脂测定 | 第35-36页 |
| 2.5.3 脂肪酸含量测定 | 第36-39页 |
| 2.5.4 丙二酸单酰转移酶(MAT)活性测定 | 第39-40页 |
| 2.5.5 苹果酸酶(ME)活性测定 | 第40-41页 |
| 2.5.6 NADPH含量测定 | 第41-43页 |
| 第三章 裂殖壶菌基因敲除体系的构建及应用 | 第43-53页 |
| 3.1 前言 | 第43-44页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第44-52页 |
| 3.2.1 裂殖壶菌基因敲除体系的构建 | 第44-50页 |
| 3.2.2 裂殖壶菌基因敲除体系的电转化及筛选 | 第50-52页 |
| 3.3 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 裂殖壶菌基因过表达体系的构建及应用 | 第53-69页 |
| 4.1 前言 | 第53页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第53-68页 |
| 4.2.1 裂殖壶菌基因过表达体系的构建 | 第53-62页 |
| 4.2.2 裂殖壶菌基因过表达体系的电转化及筛选 | 第62-63页 |
| 4.2.3 基因过表达菌株的发酵性能参数测定 | 第63-67页 |
| 4.2.4 基因过表达菌株的发酵罐放大培养 | 第67-68页 |
| 4.3 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 苹果酸对裂殖壶菌发酵生产DHA的影响 | 第69-76页 |
| 5.1 前言 | 第69页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第69-75页 |
| 5.3 本章小结 | 第75-76页 |
| 第六章 总结与展望 | 第76-79页 |
| 6.1 总结 | 第76-77页 |
| 6.2 展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 附录 | 第87-93页 |
| 在读期间发表论文 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
