| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1 前言 | 第11页 |
| 2 副溶血性弧菌快速检测技术 | 第11-13页 |
| 2.1 传统的细菌分离、纯化与鉴定 | 第11-12页 |
| 2.2 副溶血性弧菌的分子检测技术 | 第12-13页 |
| 2.2.1 PCR技术 | 第12页 |
| 2.2.2 多重PCR | 第12-13页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR | 第13页 |
| 2.2.4 环介导恒温扩增 | 第13页 |
| 3 遗传多样性研究技术 | 第13-18页 |
| 3.1 脉冲场凝胶电泳PFGE（Pulsed-field gel electrophoresis） | 第13-14页 |
| 3.2 多位点序列分型MLST（Multilocus sequence typing） | 第14-15页 |
| 3.3 多位点可变数目串联重复序列分析MLVA（Multiple Loci Variable Number of Tandem Repeats Analysis） | 第15-16页 |
| 3.4 肠道细菌基因间重复序列（ERIC-PCR） | 第16页 |
| 3.5 基因外重复回文序列聚合酶链式反应（REP-PCR ） | 第16-17页 |
| 3.6 随机放大多态性DNA（RAPD） | 第17页 |
| 3.7 限制性内切酶片段多态性RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) | 第17页 |
| 3.8 MLST-SNP | 第17-18页 |
| 4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 上海市水产品副溶血性弧菌的污染情况及毒力基因分布 | 第19-26页 |
| 1 材料与方法 | 第19-21页 |
| 1.1 样品采集 | 第19页 |
| 1.2 主要试剂和培养基 | 第19页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 1.4 实验方法 | 第20-21页 |
| 1.4.1 样品采集 | 第20页 |
| 1.4.2 菌株的分离 | 第20页 |
| 1.4.3 MPN值计算 | 第20页 |
| 1.4.4 基因组DNA的提取 | 第20页 |
| 1.4.5 毒力基因的PCR检测 | 第20页 |
| 1.4.5 毒力基因的LAMP检测 | 第20-21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-24页 |
| 2.1 不同类型水产品中副溶血性弧菌污染率 | 第21页 |
| 2.2 不同地点来源的水产品中副溶血性弧菌污染率 | 第21-22页 |
| 2.3 不同季节水产品副溶血性弧菌污染率 | 第22页 |
| 2.4 疑似副溶血性弧菌的PCR、LAMP鉴定 | 第22-23页 |
| 2.5 副溶血性弧菌tdh基因和trh基因PCR、LAMP扩增结果 | 第23页 |
| 2.6 不同水产品中致病性副溶血性弧菌检出率 | 第23-24页 |
| 3 本章小结 | 第24-26页 |
| 第三章 副溶血性弧菌对Caco-2 细胞的毒性作用 | 第26-38页 |
| 1 材料与方法 | 第26-30页 |
| 1.1 实验菌株 | 第26-27页 |
| 1.2 实验细胞株 | 第27页 |
| 1.3 主要试剂和培养基 | 第27页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 1.5 实验方法 | 第28-30页 |
| 1.5.1 人结肠腺癌细胞（Caco-2）复苏 | 第28页 |
| 1.5.2 细胞传代培养 | 第28页 |
| 1.5.3 细胞冻存 | 第28页 |
| 1.5.4 细胞侵染铺板： | 第28-29页 |
| 1.5.5 细胞毒性铺板 | 第29页 |
| 1.5.6 细菌培养及侵染前处理 | 第29页 |
| 1.5.7 细菌侵染实验 | 第29页 |
| 1.5.8 细胞毒性实验 | 第29-30页 |
| 1.5.9 标准差分析 | 第30页 |
| 2. 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.1 副溶血性弧菌侵染实验 | 第30-33页 |
| 2.1.1 3h副溶血性弧菌侵染细胞致死率 | 第31页 |
| 2.1.2 含有不同毒力基因的副溶血性弧菌侵染Caco-2 能力 | 第31-32页 |
| 2.1.3 不同来源的副溶血性弧菌侵染Caco-2 能力 | 第32页 |
| 2.1.4 不同类型水产品中副溶血性弧菌的细胞侵染能力 | 第32-33页 |
| 2.1.5 不同采样地点水产品中副溶血性弧菌的细胞侵染能力 | 第33页 |
| 2.2 细胞毒性试验 | 第33-36页 |
| 2.2.1 细菌侵染时间的优化 | 第33-34页 |
| 2.2.2 3 h细菌侵染细胞 | 第34页 |
| 2.2.3 不同副溶血性弧菌所含毒力基因及其细胞毒性 | 第34-35页 |
| 2.2.4 不同来源的副溶血性弧菌细胞毒性大小 | 第35页 |
| 2.2.5 不同类型水产品中副溶血性弧菌的细胞毒性大小 | 第35-36页 |
| 2.2.6 不同采样地点水产品中副溶血性弧菌细胞毒性大小 | 第36页 |
| 3 本章小结 | 第36-38页 |
| 第四章 REP-PCR及ERIC-PCR法对致病性副溶血性弧菌的遗传多样性研究 | 第38-48页 |
| 1 材料与方法 | 第38-40页 |
| 1.1 实验菌株 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂和培养基 | 第38页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第38-39页 |
| 1.4 实验方法 | 第39-40页 |
| 1.4.1 细菌基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 1.4.2 DNA的质量检测及质量浓度测定 | 第39页 |
| 1.4.3 REP-PCR体系 | 第39页 |
| 1.4.4 ERIC-PCR体系 | 第39-40页 |
| 1.4.5 REP-PCR及ERIC-PCR数据处理及聚类分析 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-47页 |
| 2.1 REP-PCR扩增结果 | 第40-43页 |
| 2.1.1 不同年份副溶血性弧菌REP -PCR分布 | 第41-42页 |
| 2.1.2 不同样品种类副溶血性弧菌REP –PCR分布 | 第42页 |
| 2.1.3 不同采样地点副溶血性弧菌REP -PCR分布 | 第42-43页 |
| 2.2 ERIC-PCR扩增结果 | 第43-47页 |
| 2.2.1 不同年份副溶血性弧菌ERIC-PCR分布 | 第45页 |
| 2.2.2 不同种类副溶血性弧菌ERIC-PCR分布 | 第45-46页 |
| 2.2.3 不同采样地点副溶血性弧菌ERIC-PCR分布 | 第46-47页 |
| 3.本章小结 | 第47-48页 |
| 第五章 总结与展望 | 第48-50页 |
| 5.1 全文总结 | 第48页 |
| 5.2 不足与展望 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
