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反油酸和反异油酸对脂肪干细胞成脂分化的影响及机制研究

摘要第3-4页
abstract第4-5页
第一章 文献综述第10-20页
    1.1 引言第10页
    1.2 反式脂肪酸第10-14页
        1.2.1 反式脂肪酸的来源第10-11页
            1.2.1.1 食用油的氢化第10-11页
            1.2.1.2 油脂的精炼和高温处理第11页
            1.2.1.3 反刍动物来源第11页
        1.2.2 加工来源反式脂肪酸的危害第11-13页
            1.2.2.1 心血管疾病第11页
            1.2.2.2 Ⅱ型糖尿病第11-12页
            1.2.2.3 婴幼儿及青少年生长发育第12页
            1.2.2.4 肥胖第12页
            1.2.2.5 其他危害第12-13页
        1.2.3 加工来源反式脂肪酸的作用机制第13-14页
            1.2.3.1 加工来源反式脂肪酸与血脂第13页
            1.2.3.2 加工来源反式脂肪酸与内皮细胞功能第13页
            1.2.3.3 加工来源反式脂肪酸与炎症因子第13-14页
            1.2.3.4 加工来源反式脂肪酸与胰岛素抵抗第14页
        1.2.4 反刍动物来源反式脂肪酸的生理功能第14页
    1.3 肥胖与成脂分化第14-18页
        1.3.1 成脂分化的一般过程第15-16页
            1.3.1.1 生长停滞阶段第15页
            1.3.1.2 克隆扩增阶段第15页
            1.3.1.3 早期分化相关基因表达阶段第15-16页
            1.3.1.4 晚期分化阶段第16页
        1.3.2 成脂分化与Wnt/β-catenin信号通路第16页
        1.3.3 脂肪干细胞(ADSCs)第16-17页
            1.3.3.1 ADSCs的分离第17页
            1.3.3.2 ADSCs的培养第17页
            1.3.3.3 ADSCs的鉴定第17页
        1.3.4 成脂分化程度的检测方法第17-18页
            1.3.4.1 油红O染色法第17-18页
            1.3.4.2 甘油三酯测定法第18页
            1.3.4.3 GPDH酶测定法第18页
            1.3.4.4 荧光染色法第18页
            1.3.4.5 其他方法第18页
    1.4 选题意义第18-19页
    1.5 研究内容第19-20页
第二章 实验材料与方法第20-32页
    2.1 实验材料第20-23页
        2.1.1 C57/BL6J小鼠第20页
        2.1.2 材料第20-22页
        2.1.3 仪器设备第22-23页
    2.2 试剂配制第23-25页
        2.2.1 脂肪酸第23页
        2.2.2 磷酸盐缓冲液(PBS)第23页
        2.2.3 100×双抗(P/S)第23页
        2.2.4 脂肪干细胞培养基第23页
        2.2.5 脂肪干细胞冻存液第23页
        2.2.6 胰蛋白酶(0.25%)第23页
        2.2.7 Ⅰ型胶原酶(0.1%)第23-24页
        2.2.8 噻唑蓝(MTT)第24页
        2.2.9 油红O染液第24页
        2.2.10 茜素红染液第24页
        2.2.11 苏木精染液第24页
        2.2.12 10%中性甲醛第24页
        2.2.13 成脂诱导培养基(ADM)第24-25页
        2.2.14 成骨诱导培养基第25页
        2.2.15 SDS电泳缓冲液(10×)第25页
        2.2.16 转印缓冲液(10×)第25页
        2.2.17 过硫酸铵(10%)第25页
        2.2.18 PBST缓冲液第25页
        2.2.19 封闭液(5%脱脂奶粉)第25页
    2.3 实验方法第25-32页
        2.3.1 脂肪干细胞的原代培养第25-26页
        2.3.2 脂肪干细胞的传代培养第26页
        2.3.3 脂肪干细胞的计数第26页
        2.3.4 脂肪干细胞的冻存第26-27页
        2.3.5 脂肪干细胞的复苏第27页
        2.3.6 脂肪干细胞的成脂诱导第27页
            2.3.6.1 细胞中脂滴的染色第27页
        2.3.7 脂肪干细胞的成骨诱导第27-28页
            2.3.7.1 细胞中钙结节的染色第27-28页
            2.3.7.2 细胞中碱性磷酸酶染色(ALP染色)第28页
        2.3.8 脂肪干细胞表面抗原标志鉴定第28页
        2.3.9 脂肪酸浓度筛选第28页
        2.3.10 脂肪酸干预脂肪干细胞成脂分化第28页
        2.3.11 油红O染色观察细胞分化程度第28-29页
        2.3.12 胞内甘油三酯测定鉴定细胞分化程度第29页
        2.3.13 BCA法测定细胞总蛋白第29页
        2.3.14 蛋白免疫印迹实验第29-31页
            2.3.14.1 细胞总蛋白提取第29-30页
            2.3.14.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳第30页
            2.3.14.3 电转印(半干式)第30页
            2.3.14.4 免疫反应第30页
            2.3.14.5 增强化学发光显影第30-31页
        2.3.15 细胞免疫荧光第31页
        2.3.16 统计分析第31-32页
第三章 结果与讨论第32-47页
    3.1 脂肪干细胞原代培养及鉴定第32-35页
        3.1.1 形态学观察第32页
        3.1.2 多向分化潜能分析第32-33页
        3.1.3 表面抗原标志鉴定第33-35页
    3.2 反油酸和反异油酸对脂肪干细胞成脂分化的影响第35-39页
        3.2.1 脂肪酸浓度筛选第35-36页
        3.2.2 油红O染色观察反油酸和反异油酸对脂肪干细胞脂滴形成的影响第36-38页
        3.2.3 甘油三酯测定法分析反油酸和反异油酸对脂肪干细胞脂滴积累的影响第38-39页
    3.3 反油酸和反异油酸促进脂肪干细胞成脂分化的机制探讨第39-45页
        3.3.1 反油酸和反异油酸对细胞成脂分化过程中 β-catenin蛋白表达的影响第39-40页
        3.3.2 反油酸和反异油酸对细胞成脂分化过程中胞浆和胞核中 β-catenin蛋白表达的影响第40-41页
        3.3.3 Wnt/β-catenin通路的激活剂拮抗反油酸和反异油酸的促进ADSCs成脂分化作用第41-45页
            3.3.3.1 油红O染色法观察Li Cl拮抗反式脂肪酸对细胞脂滴形成的促进作用第41页
            3.3.3.2 甘油三酯测定法分析Li Cl拮抗反式脂肪酸对细胞甘油三酯积累的促进作用第41-43页
            3.3.3.3 Li Cl抑制三种脂肪酸对细胞 β-catenin蛋白表达的下调作用第43-45页
    3.4 讨论第45-47页
第四章 结论第47-48页
参考文献第48-52页
致谢第52-53页

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