| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-16页 |
| 1 绪论 | 第16-28页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·荧光假单胞菌概述 | 第16-18页 |
| ·荧光假单胞菌的生理生化特征 | 第16-17页 |
| ·荧光假单胞菌的分布 | 第17页 |
| ·荧光假单胞菌的流行病学特征 | 第17-18页 |
| ·荧光假单菌分离和检测方法 | 第18-22页 |
| ·传统分离鉴定方法 | 第18-19页 |
| ·快速检测方法 | 第19-22页 |
| ·荧光定量 PCR 原理和应用 | 第22-27页 |
| ·非特异性染料法 | 第22-23页 |
| ·水解探针法 | 第23-26页 |
| ·其它荧光定量 P CR 方法 | 第26-27页 |
| ·研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 2 荧光假单胞菌特异性检测靶点筛选 | 第28-43页 |
| ·材料与方法 | 第28-39页 |
| ·细菌菌株和载体质粒 | 第28-32页 |
| ·培养基和试剂 | 第32-33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·菌株的活化与培养 | 第33-34页 |
| ·基因组 DNA 提取及纯度分析 | 第34-35页 |
| ·检测靶点筛选和引物设计 | 第35-36页 |
| ·初步特异性评价 | 第36-39页 |
| ·结果 | 第39-40页 |
| ·生物信息学筛选检测靶点 | 第39页 |
| ·ITS1 和ITS2 的 PCR 验证 | 第39页 |
| ·gyrB8 和gyrB10 的 PCR 验证 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-43页 |
| 3 荧光假单胞菌常规 PCR 检测方法的建立和评价 | 第43-60页 |
| ·材料与方法 | 第43-51页 |
| ·细菌菌株和载体质粒 | 第43-45页 |
| ·主要培养基和试剂 | 第45-47页 |
| ·仪器与设备 | 第47-48页 |
| ·PCR 反应体系 | 第48页 |
| ·Mg~(2 +) 浓度优化实验 | 第48页 |
| ·退火温度优化实验 | 第48-49页 |
| ·特异性评价 | 第49页 |
| ·灵敏度评价 | 第49页 |
| ·抗干扰能力评价 | 第49-50页 |
| ·人工污染实验 | 第50页 |
| ·食品样品检测 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-56页 |
| ·P CR 反应体系建立 | 第51-52页 |
| ·特异性评价 | 第52页 |
| ·灵敏度评价 | 第52-54页 |
| ·抗干扰能力评价 | 第54页 |
| ·人工污染食品样品实验 | 第54-55页 |
| ·食品样品检测 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-60页 |
| 4 基于 TaqMan 探针的荧光定量 PCR 检测荧光假单胞菌方法的建立和评价 | 第60-78页 |
| ·材料与方法 | 第60-66页 |
| ·细菌菌株和载体质粒 | 第60-62页 |
| ·主要培养基和试剂 | 第62-63页 |
| ·仪器与设备 | 第63页 |
| ·引物和探针的设计及初步筛选 | 第63页 |
| ·P CR 反应体系 | 第63页 |
| ·退火温度优化实验 | 第63-64页 |
| ·探针浓度优化实验 | 第64页 |
| ·标准曲线绘制 | 第64页 |
| ·特异性评价 | 第64-65页 |
| ·灵敏度评价 | 第65页 |
| ·抗干扰能力评价 | 第65页 |
| ·人工污染豆奶样品实验 | 第65页 |
| ·食品样品检测 | 第65页 |
| ·初步定量计算 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-74页 |
| ·引物和探针的设计及初步筛选 | 第66-67页 |
| ·P CR 反应体系建立 #S2 | 第67-68页 |
| ·标准曲线绘制 | 第68-69页 |
| ·特异性评价 | 第69页 |
| ·灵敏度评价 | 第69-71页 |
| ·抗干扰能力评价 | 第71-72页 |
| ·人工污染食品样品实验 | 第72-73页 |
| ·食品样品检测 | 第73页 |
| ·初步定量计算 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-78页 |
| 5 总结和展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第85-86页 |
| 附件 | 第86页 |