| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-34页 |
| 1.1. 引言 | 第14页 |
| 1.2. γ-聚谷氨酸的研究进展 | 第14-26页 |
| 1.2.1. γ-聚谷氨酸的分子结构和性质 | 第14-15页 |
| 1.2.2. 合成γ-聚谷氨酸的微生物及相关代谢途径 | 第15-18页 |
| 1.2.2.1. 合成γ-聚谷氨酸的微生物 | 第15页 |
| 1.2.2.2. γ-聚谷氨酸的合成代谢途径 | 第15-17页 |
| 1.2.2.3. 微生物合成γ-聚谷氨酸的代谢调节 | 第17-18页 |
| 1.2.3. 微生物合成γ-聚谷氨酸的发酵工程研究 | 第18-23页 |
| 1.2.4. γ-聚谷氨酸的分离纯化 | 第23页 |
| 1.2.5. γ-聚谷氨酸的应用 | 第23-26页 |
| 1.2.5.1. γ-聚谷氨酸在医药领域的应用 | 第23-24页 |
| 1.2.5.2. γ-聚谷氨酸在工业领域的应用 | 第24-25页 |
| 1.2.5.3. γ-聚谷氨酸在农业领域的应用 | 第25-26页 |
| 1.3. β-聚苹果酸的研究进展 | 第26-32页 |
| 1.3.1. β-聚苹果酸的分子结构和性质 | 第26-27页 |
| 1.3.2. β-聚苹果酸的合成方法 | 第27-28页 |
| 1.3.3. β-聚苹果酸的微生物合成途径 | 第28-29页 |
| 1.3.4. 微生物生产β-聚苹果酸的影响因素 | 第29-30页 |
| 1.3.5. β-聚苹果酸的分离纯化 | 第30页 |
| 1.3.6. β-聚苹果酸的应用 | 第30-32页 |
| 1.4. 本论文的研究思路和主要研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-44页 |
| 2.1 菌种 | 第34页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第34-35页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第35页 |
| 2.3 培养基和培养条件 | 第35-36页 |
| 2.3.1 培养基 | 第35-36页 |
| 2.3.1.1 枯草芽孢杆菌C10培养基 | 第35-36页 |
| 2.3.1.2 出芽短梗霉ZD-3d培养基 | 第36页 |
| 2.3.2 培养条件 | 第36页 |
| 2.3.2.1 枯草芽孢杆菌C10培养条件 | 第36页 |
| 2.3.2.2 出芽短梗霉ZD-3d培养条件 | 第36页 |
| 2.4 分析测定方法 | 第36-44页 |
| 2.4.1 pH测定 | 第37页 |
| 2.4.2 生物量的测定 | 第37页 |
| 2.4.3 发酵液中葡萄糖和谷氨酸浓度的测定 | 第37页 |
| 2.4.4 发酵液粘度测定 | 第37页 |
| 2.4.5 γ-PGA的提取 | 第37页 |
| 2.4.6 γ-PGA的测定方法 | 第37-40页 |
| 2.4.6.1 γ-PGA酸水解测定方法 | 第37-39页 |
| 2.4.6.2 γ-PGA分子量的测定 | 第39-40页 |
| 2.4.7 有机酸含量的测定 | 第40-41页 |
| 2.4.8 多糖含量的测定 | 第41-42页 |
| 2.4.9 铵态氮的测定方法 | 第42-44页 |
| 第三章 谷氨酸非依赖性γ-PGA生产菌的筛选和培养条件优化 | 第44-60页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.2.2 实验仪器和试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.3 培养基 | 第45页 |
| 3.2.4 谷氨酸非依赖性γ-PGA生产菌种的筛选 | 第45页 |
| 3.2.5 培养条件优化 | 第45页 |
| 3.2.6 γ-PGA产量的测定方法 | 第45页 |
| 3.2.7 产物鉴定 | 第45页 |
| 3.2.8 谷氨酸非依赖性γ-PGA生产菌种的鉴定 | 第45-47页 |
| 3.2.8.1 菌种形态观察 | 第46页 |
| 3.2.8.2 VITEK系统鉴定 | 第46页 |
| 3.2.8.3 16SrDNA鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-58页 |
| 3.3.1 菌种筛选结果 | 第47页 |
| 3.3.2 产物鉴定结果 | 第47-49页 |
| 3.3.2.1 产物酸水解鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.2.2 产物分子量测定 | 第48-49页 |
| 3.3.3 菌种鉴定 | 第49-52页 |
| 3.3.3.1 菌种形态特征 | 第49-50页 |
| 3.3.3.2 菌种VITEK鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.3.3 菌种16S rDNA序列分析鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.4 枯草芽孢杆菌C10培养条件优化 | 第52-58页 |
| 3.3.4.1 不同碳源对菌体生长和γ-PGA产量的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.4.2 不同氮源对菌体生长和γ-PGA产量的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.4.3 谷氨酸和柠檬酸底物对菌体生长和γ-PGA产量的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.4.4 氯化铵浓度对菌体生长和γ-PGA产量的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.4.5 磷酸盐浓度对菌体生长和γ-PGA产量的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.4.6 培养温度对菌体生长和γ-PGA产量的影响 | 第57页 |
| 3.3.4.7 接种量对菌体生长和γ-PGA产量的影响 | 第57-58页 |
| 3.4 小结 | 第58-60页 |
| 第四章 高产γ-PGA的间歇与流加发酵工艺的研究 | 第60-72页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-61页 |
| 4.2.1 菌株 | 第60页 |
| 4.2.2 培养基 | 第60-61页 |
| 4.2.3 培养方法 | 第61页 |
| 4.2.4 测定方法 | 第61页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第61-70页 |
| 4.3.1 流加氨水和氢氧化钠控制pH对间歇发酵的影响 | 第61-63页 |
| 4.3.2 控制不同的pH对间歇发酵的影响 | 第63-65页 |
| 4.3.3 间歇发酵过程中γ-PGA分子量的变化 | 第65-66页 |
| 4.3.4 柠檬酸溶液的流加发酵 | 第66-67页 |
| 4.3.5 柠檬酸与氮源混合液的流加发酵 | 第67-70页 |
| 4.4 小结 | 第70-72页 |
| 第五章 外加有机酸刺激γ-PGA的生物合成和内在机理探讨 | 第72-84页 |
| 5.1 引言 | 第72页 |
| 5.2 材料与方法 | 第72-76页 |
| 5.2.1 菌株 | 第72页 |
| 5.2.2 培养基和培养方法 | 第72-73页 |
| 5.2.2.1 培养基 | 第72-73页 |
| 5.2.2.2 培养方法 | 第73页 |
| 5.2.3 分析测定方法 | 第73页 |
| 5.2.4 酶活性测定方法 | 第73-76页 |
| 5.2.4.1 胞提取物的制备 | 第73页 |
| 5.2.4.2 丙酮酸羧化酶活性分析 | 第73-74页 |
| 5.2.4.3 异柠檬酸脱氢酶活性分析 | 第74页 |
| 5.2.4.4 谷氨酸脱氢酶活性分析 | 第74-75页 |
| 5.2.4.5 α-酮戊二酸脱氢酶复合体活性分析 | 第75页 |
| 5.2.4.6 蛋白浓度测定 | 第75-76页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第76-81页 |
| 5.3.1 不同有机酸对枯草芽孢杆菌C10合成γ-PGA的影响 | 第76-78页 |
| 5.3.2 草酸和柠檬酸发酵过程曲线 | 第78-79页 |
| 5.3.3 有机酸对关键节点酶活性的影响与代谢途径分析 | 第79-81页 |
| 5.4 小结 | 第81-84页 |
| 第六章 枯草芽孢杆菌C10合成γ-PGA的代谢流分析 | 第84-96页 |
| 6.1 引言 | 第84页 |
| 6.2 材料与方法 | 第84-85页 |
| 6.2.1. 菌株 | 第84页 |
| 6.2.2. 培养基和培养方法 | 第84-85页 |
| 6.2.3. 分析测定方法 | 第85页 |
| 6.2.4. 代谢流量分析方法 | 第85页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第85-95页 |
| 6.3.1. 代谢网络模型 | 第85-92页 |
| 6.3.1.1. 枯草芽孢杆菌C10合成γ-PGA代谢网络的构建 | 第85-90页 |
| 6.3.1.2. 代谢流量分析 | 第90-92页 |
| 6.3.2. 草酸和柠檬酸对代谢流量分布的影响 | 第92-95页 |
| 6.4 小结 | 第95-96页 |
| 第七章 β-聚苹果酸高产菌种的筛选与鉴定 | 第96-108页 |
| 7.1. 引言 | 第96页 |
| 7.2. 材料与方法 | 第96-98页 |
| 7.2.1. 分离菌种材料 | 第96页 |
| 7.2.2. 培养基 | 第96-97页 |
| 7.2.3. 培养方法 | 第97页 |
| 7.2.4. 菌种的分离与筛选方法 | 第97页 |
| 7.2.5. 产物鉴定方法 | 第97页 |
| 7.2.5.1. PMLA的提取纯化 | 第97页 |
| 7.2.5.2. PMLA的酸水解 | 第97页 |
| 7.2.5.3. FTIR红外光谱 | 第97页 |
| 7.2.5.4. ~(13)C-NMR核磁共振谱 | 第97页 |
| 7.2.6. 菌种鉴定方法 | 第97-98页 |
| 7.2.6.1. 菌种形态观察 | 第98页 |
| 7.2.6.2. 分子鉴定 | 第98页 |
| 7.2.6.3. 其他分析测定方法 | 第98页 |
| 7.3. 结果与讨论 | 第98-106页 |
| 7.3.1. 出芽短梗霉ZD-3d的分离与鉴定 | 第99-100页 |
| 7.3.2. 产物的结构鉴定 | 第100-102页 |
| 7.3.3. PMLA分子量 | 第102页 |
| 7.3.4. PMLA水解 | 第102-106页 |
| 7.4. 小结 | 第106-108页 |
| 第八章 出芽短梗霉ZD-3d高效合成β-聚苹果酸的研究 | 第108-120页 |
| 8.1 引言 | 第108页 |
| 8.2 材料与方法 | 第108-109页 |
| 8.2.1 菌株 | 第108页 |
| 8.2.2 培养基和培养方法 | 第108-109页 |
| 8.2.3 测定方法 | 第109页 |
| 8.3 结果与讨论 | 第109-118页 |
| 8.3.1 PMLA发酵培养基单因素优化 | 第109-113页 |
| 8.3.1.1 碳源对PMLA产生和细胞生长的影响 | 第109页 |
| 8.3.1.2 氮源对PMLA产生和细胞生长的影响 | 第109-110页 |
| 8.3.1.3 有机酸对PMLA产生和细胞生长的影响 | 第110-111页 |
| 8.3.1.4 碳酸钙对PMLA产生和细胞生长的影响 | 第111-112页 |
| 8.3.1.5 金属离子对PMLA产生和细胞生长的影响 | 第112-113页 |
| 8.3.2 PB实验设计评估出芽短梗霉ZD-3d的营养需求和培养条件 | 第113-117页 |
| 8.3.3 出芽短梗霉ZD-3d在10L发酵罐的发酵培养过程 | 第117-118页 |
| 8.4 小结 | 第118-120页 |
| 结论与展望 | 第120-123页 |
| 参考文献 | 第123-136页 |
| 附录 | 第136-138页 |
| 作者简历 | 第138页 |
| 在学期间所取得的科研成果 | 第138页 |
