| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| ·概述 | 第10-11页 |
| ·国内外研究概况及发展趋势 | 第11-19页 |
| ·酿酒酵母体内的甲羟戊酸途径 | 第11-14页 |
| ·甲羟戊酸途径的调控机制 | 第14-15页 |
| ·酿酒酵母生产萜类的研究进展 | 第15-18页 |
| ·酿酒酵母耐受单萜机制的研究进展 | 第18-19页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第19-21页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第19-20页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 酿酒酵母单萜生产平台构建 | 第21-34页 |
| ·前言 | 第21-22页 |
| ·材料与方法 | 第22-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第22-24页 |
| ·培养基及培养条件 | 第24-25页 |
| ·实验主要仪器及耗材 | 第25页 |
| ·分子生物学操作 | 第25-27页 |
| ·气相色谱与质谱检测（GC-MS） | 第27页 |
| ·结果 | 第27-32页 |
| ·在酿酒酵母内表达香叶醇合成酶 | 第27-28页 |
| ·在酿酒酵母内共表达香叶醇合成酶及 GPP 合成酶 | 第28-29页 |
| ·在酿酒酵母内表达柠檬烯合成酶未检测出柠檬烯 | 第29-30页 |
| ·在酿酒酵母内共表达柠檬烯合成酶及 NPP 合成酶 | 第30页 |
| ·在酿酒酵母内共表达香叶醇合成酶及 NPP 合成酶 | 第30-31页 |
| ·酿酒酵母内表达单萜合成酶对菌体生长的影响 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·香叶醇的产量受底物 GPP 供给制约 | 第32页 |
| ·推论新的酿酒酵母单萜合成机制 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 代谢工程改造酿酒酵母过量生产单萜香叶醇 | 第34-45页 |
| ·前言 | 第34页 |
| ·材料与方法 | 第34-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第34-36页 |
| ·培养基及培养方法 | 第36页 |
| ·试剂、酶、引物、Marker 及相关试剂盒 | 第36-37页 |
| ·分析方法 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-43页 |
| ·代谢工程改造酿酒酵母丙酮酸脱氢酶（PD）途径 | 第37-38页 |
| ·代谢工程改造酿酒酵母 MVA 途径 | 第38-39页 |
| ·综合改造酿酒酵母 PD 与 MVA 途径 | 第39-40页 |
| ·过量表达 ERG20K197G对单萜产量的影响 | 第40-41页 |
| ·降低流经 tRNA 合成途径的代谢通量对单萜产量的影响 | 第41-42页 |
| ·代谢工程改造对菌体生长的影响 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·代谢工程改造酿酒酵母 MVA 途径增加代谢通量 | 第43页 |
| ·代谢工程改造酿酒酵母强化 GPP 供给 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 基于转录组学的酿酒酵母单萜胁迫抗性机制解析 | 第45-58页 |
| ·前言 | 第45页 |
| ·材料与方法 | 第45-47页 |
| ·菌种与培养条件 | 第45页 |
| ·单萜处理条件 | 第45页 |
| ·RNA 的抽提及 Aglient 表达谱芯片的制备 | 第45-46页 |
| ·cDNA 制备及定量 PCR | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-56页 |
| ·转录组数据结果 | 第47-54页 |
| ·定量 PCR 验证 | 第54页 |
| ·碳代谢及 NADPH 再生途径 | 第54-55页 |
| ·氨基酸、嘌呤及生物素代谢 | 第55-56页 |
| ·氧化还原平衡与 DNA 损伤修复 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·酿酒酵母增强了单萜胁迫下的细胞膜合成能力 | 第56-57页 |
| ·酿酒酵母增强了单萜胁迫下调控体内氧化还原平衡的能力 | 第57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 依赖于麦角固醇代谢的机制保护酿酒酵母抵御单萜胁迫 | 第58-69页 |
| ·前言 | 第58-59页 |
| ·材料与方法 | 第59-62页 |
| ·菌株 | 第59页 |
| ·培养基及培养条件 | 第59页 |
| ·单萜处理方法 | 第59页 |
| ·测定方法 | 第59-62页 |
| ·结果 | 第62-66页 |
| ·外源麦角固醇提高酿酒酵母单萜胁迫下细胞存活能力 | 第62页 |
| ·胞内麦角固醇含量变化 | 第62-63页 |
| ·菌体麦角固醇合成能力的变化 | 第63-64页 |
| ·细胞膜流动性的变化 | 第64-65页 |
| ·细胞膜通透性的变化 | 第65-66页 |
| ·细胞膜脂肪酸成分的变化 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·外源麦角固醇提高酿酒酵母细胞膜损伤修复能力 | 第66-67页 |
| ·酿酒酵母单萜耐受能力与其胞内麦角固醇含量呈正相关关系 | 第67页 |
| ·本章小结 | 第67-69页 |
| 第六章 酿酒酵母应对单萜诱发的活性氧胁迫的应答机制 | 第69-81页 |
| ·前言 | 第69页 |
| ·材料与方法 | 第69-72页 |
| ·菌株 | 第69-70页 |
| ·培养基及培养条件 | 第70页 |
| ·单萜处理条件 | 第70页 |
| ·测定方法 | 第70-72页 |
| ·结果 | 第72-77页 |
| ·单萜柠檬烯处理对酿酒酵母内外 ROS 水平的影响 | 第72-73页 |
| ·单萜处理对膜脂氧化程度的影响 | 第73-74页 |
| ·单萜处理对抗氧化酶活性及总抗氧化能力的影响 | 第74-75页 |
| ·单萜处理对胞内抗氧化物含量的影响 | 第75页 |
| ·单萜处理对关键基因转录水平的影响 | 第75-77页 |
| ·单萜处理对胞内 NADPH 水平的影响 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| ·单萜胁迫诱发的活性氧积累造成酿酒酵母菌体凋亡 | 第77-78页 |
| ·酿酒酵母单萜胁迫情况下激活了体内抗氧化机制 | 第78-79页 |
| ·本章小结 | 第79-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 论文创新点 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-101页 |
| 附录：作者在读博期间发表的论文 | 第101页 |
