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猴头菇多糖的结构表征、免疫调节活性及其机理研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
缩略词表第10-19页
第一章 绪论第19-48页
    1.1 引言第19页
    1.2 真菌多糖的研究概况第19-34页
        1.2.1 真菌多糖的提取和纯化第19-21页
        1.2.2 真菌多糖的结构解析第21-26页
            1.2.2.1 多糖结构的化学分析第22-23页
            1.2.2.2 仪器分析法第23-25页
            1.2.2.3 生物学法第25-26页
        1.2.3 真菌多糖的免疫调节活性第26-31页
            1.2.3.1 真菌多糖对免疫器官和组织的影响第27页
            1.2.3.2 真菌多糖对免疫细胞的作用第27-31页
        1.2.4 真菌多糖发挥作用的模式识别受体及转导通路第31-34页
    1.3 猴头菇及猴头菇多糖研究概况第34-35页
        1.3.1 猴头菇简介第34页
        1.3.2 猴头菇多糖研究进展第34-35页
    1.4 本课题研究意义和研究内容第35-39页
        1.4.1 研究目的及意义第35-36页
        1.4.2 研究内容和技术路线第36-39页
    参考文献第39-48页
第二章 猴头菇多糖的提取、分离纯化和结构鉴定第48-71页
    2.1 引言第48页
    2.2 实验材料与试剂第48-50页
    2.3 实验主要仪器与设备第50-51页
    2.4 实验方法第51-55页
        2.4.1 猴头菇粗多糖的提取第51页
        2.4.2 猴头菇多糖的醇沉、去蛋白第51-52页
        2.4.3 猴头菇多糖的纯化第52页
        2.4.4 猴头菇纯化多糖的基本成分测定第52-53页
        2.4.5 分子量的测定第53页
        2.4.6 傅里叶变换红外光谱(FT-IR)测定第53页
        2.4.7 单糖组成第53-54页
        2.4.8 高碘酸氧化和Smith降解第54-55页
        2.4.9 热稳定(TG/DSC)分析第55页
        2.4.10 核磁共振(NMR)分析第55页
        2.4.11 数据统计分析第55页
    2.5 实验结果与分析第55-65页
        2.5.1 猴头菇粗多糖的提取第55-56页
        2.5.2 猴头菇多糖的离子交换柱层析第56-57页
        2.5.3 猴头菇多糖HEP-W的葡聚糖凝胶柱层析第57页
        2.5.4 猴头菇多糖HEP-W的纯度及基本成分测定第57-58页
        2.5.5 猴头菇多糖HEP-W的结构鉴定第58-65页
            2.5.5.1 HPGPC测定第58-59页
            2.5.5.2 傅里叶变换红外光谱(FT-IR)分析第59-60页
            2.5.5.3 单糖组成分析第60-61页
            2.5.5.4 高碘酸氧化和Smith降解第61-63页
            2.5.5.5 热稳定性(TG-DSC)分析第63-64页
            2.5.5.6 核磁共振分析第64-65页
    2.6 本章小结第65-67页
    参考文献第67-71页
第三章 猴头菇纯化多糖HEP-W的链构象表征及小鼠脾淋巴细胞免疫活性第71-93页
    3.1 引言第71-72页
    3.2 实验材料与试剂第72-74页
        3.2.1 实验材料第72页
        3.2.2 实验动物第72页
        3.2.3 实验试剂第72-74页
    3.3 实验主要仪器与设备第74-75页
    3.4 实验方法第75-79页
        3.4.1 猴头菇多糖HEP-W溶液的配制第75-76页
        3.4.2 猴头菇多糖HEP-W的链构象表征第76-77页
            3.4.2.1 原子力显微镜(AFM)观测第76页
            3.4.2.2 刚果红实验第76页
            3.4.2.3 X-射线衍射(XRD)分析第76页
            3.4.2.4 猴头菇多糖HEP-W的粘度分析第76页
            3.4.2.5 猴头菇多糖HEP-W的粒径分布测定第76-77页
        3.4.3 猴头菇多糖HEP-W对正常小鼠脾淋巴细胞的免疫活性研究第77-78页
            3.4.3.1 猴头菇多糖HEP-W的内毒素(LPS)检测第77页
            3.4.3.2 小鼠脾淋巴细胞的分离第77页
            3.4.3.3 小鼠脾淋巴细胞增殖能力测定第77-78页
            3.4.3.4 IL-2、IL-4、IFN-γ分泌含量的测定第78页
        3.4.4 数据统计分析第78-79页
    3.5 结果与分析第79-88页
        3.5.1 猴头菇多糖HEP-W的链构象表征第79-84页
            3.5.1.1 猴头菇多糖HEP-W的原子力显微镜(AFM)观察第79-80页
            3.5.1.2 猴头菇多糖HEP-W的刚果红实验第80-81页
            3.5.1.3 猴头菇多糖HEP-W的X射线衍射分析第81-82页
            3.5.1.4 猴头菇多糖HEP-W的粘度分析第82-83页
            3.5.1.5 猴头菇多糖HEP-W的粒度分布第83-84页
        3.5.2 猴头菇多糖HEP-W对正常小鼠脾淋巴细胞的免疫活性第84-88页
            3.5.2.1 内毒素的测定第84-85页
            3.5.2.2 猴头菇多糖HEP-W对正常小鼠脾淋巴细胞的增殖作用第85-87页
            3.5.2.3 猴头菇多糖HEP-W对正常小鼠脾淋巴细胞体外诱导的IL-2、IL-4和IFN-γ的影响第87-88页
    3.6 本章小结第88-90页
    参考文献第90-93页
第四章 猴头菇纯化多糖HEP-W对巨噬细胞的免疫调节活性研究第93-115页
    4.1 前言第93-94页
    4.2 实验材料与试剂第94-96页
        4.2.1 实验材料第94页
        4.2.2 实验试剂第94-96页
    4.3 实验主要仪器与设备第96-97页
    4.4 实验方法第97-101页
        4.4.1 猴头菇多糖HEP-W溶液配制及实验分组第97页
        4.4.2 巨噬细胞RAW264.7的培养第97页
        4.4.3 猴头菇多糖HEP-W对细胞存活率的影响第97-98页
        4.4.4 猴头菇多糖HEP-W对细胞活性氧(ROS)水平的影响第98页
        4.4.5 猴头菇多糖HEP-W对细胞吞噬中性红的影响第98页
        4.4.6 猴头菇多糖HEP-W对细胞吞噬FITC-标记的大肠杆菌的影响第98-99页
        4.4.7 猴头菇多糖HEP-W对细胞分泌NO、IL-6及TNF-α的影响第99页
        4.4.8 猴头菇多糖HEP-W对iNOS、IL-6和TNF-αmRNA表达的影响第99-101页
        4.4.9 数据统计分析第101页
    4.5 结果与分析第101-111页
        4.5.1 猴头菇多糖HEP-W对巨噬细胞存活率的影响第101-102页
        4.5.2 猴头菇多糖HEP-W对巨噬细胞分泌活性氧(ROS)的影响第102-103页
        4.5.3 猴头菇多糖HEP-W对巨噬细胞吞噬能力的影响第103-106页
            4.5.3.1 猴头菇多糖HEP-W对细胞吞噬中性红的影响第104-105页
            4.5.3.2 猴头菇多糖HEP-W对细胞吞噬FITC标记的大肠杆菌的影响第105-106页
        4.5.4 猴头菇多糖HEP-W对巨噬细胞分泌NO的影响第106-107页
        4.5.5 猴头菇多糖HEP-W对巨噬细胞分泌IL-6及TNF-α的影响第107-109页
        4.5.6 猴头菇多糖HEP-W对巨噬细胞细胞因子mRNA表达的影响第109-111页
    4.6 本章小结第111页
    参考文献第111-115页
第五章 猴头菇纯化多糖HEP-W的免疫调节机理研究第115-142页
    5.1 前言第115-116页
    5.2 实验材料与试剂第116-120页
        5.2.1 实验材料第116页
        5.2.2 实验试剂第116-120页
    5.3 实验主要仪器与设备第120-121页
    5.4 实验方法第121-124页
        5.4.1 猴头菇纯化多糖HEP-W溶液配制及实验分组第121页
        5.4.2 小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养第121页
        5.4.3 小鼠巨噬细胞膜表面识别HEP-W受体的研究第121-122页
        5.4.4 Westernblot检测HEP-W对巨噬细胞免疫通路的影响第122-124页
        5.4.5 数据统计分析第124页
    5.5 结果与分析第124-137页
        5.5.1 猴头菇多糖HEP-W对RAW264.7细胞表面膜受体的识别第124-129页
            5.5.1.1 不同细胞膜受体对HEP-W分泌NO、IL-6以及TNF-α的影响第125-128页
            5.5.1.2 不同细胞膜受体对HEP-W分泌ROS的影响第128-129页
        5.5.2 猴头菇多糖HEP-W对MyD88依赖性(MyD88/IRAK-1/TRAF-6信号传导通路的影响第129-133页
            5.5.2.1 猴头菇多糖HEP-W对MyD88信号传导通路的影响第129-130页
            5.5.2.2 猴头菇多糖HEP-W对IRAK-1信号传导通路的影响第130-132页
            5.5.2.3 猴头菇多糖HEP-W对TRAF-6信号传导通路的影响第132-133页
        5.5.3 猴头菇多糖HEP-W对PI3K/Akt信号传导通路的影响第133-135页
        5.5.4 猴头菇多糖HEP-W对MAPKs信号传导通路的影响第135-137页
        5.5.5 猴头菇多糖HEP-W激活巨噬细胞可能的信号传导通路第137页
    5.6 本章小结第137-138页
    参考文献第138-142页
第六章 猴头菇纯化多糖HEP-W对环磷酰胺致免疫低下小鼠的影响第142-163页
    6.1 前言第142-143页
    6.2 实验材料与试剂第143-146页
        6.2.1 实验材料第143页
        6.2.2 实验动物和细胞株第143-144页
        6.2.3 实验试剂第144-146页
    6.3 实验主要仪器与设备第146-148页
    6.4 实验方法第148-151页
        6.4.1 猴头菇多糖HEP-W对免疫抑制小鼠外周血白细胞及骨髓有核细胞计数的影响第148页
        6.4.2 猴头菇多糖HEP-W对免疫抑制小鼠脾脏指数的影响第148页
        6.4.3 猴头菇多糖HEP-W对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的影响第148-149页
            6.4.3.1 脾淋巴细胞的获得第148-149页
            6.4.3.2 CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活力第149页
        6.4.4 猴头菇多糖HEP-W对免疫抑制小鼠NK细胞杀伤活力的影响第149-150页
        6.4.5 猴头菇多糖HEP-W对免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响第150页
        6.4.6 猴头菇多糖HEP-W对免疫抑制小鼠血清中IL-2含量的影响第150页
        6.4.7 猴头菇多糖HEP-W对免疫抑制小鼠血清中抗氧化指标的影响第150-151页
        6.4.8 数据统计分析第151页
    6.5 结果与分析第151-159页
        6.5.1 猴头菇纯化多糖HEP-W对免疫抑制小鼠外周血白细胞及骨髓有核细胞的影响第151-153页
        6.5.2 猴头菇纯化多糖HEP-W对免疫抑制小鼠脾脏指数、NK细胞活性的影响第153-154页
        6.5.3 猴头菇纯化多糖HEP-W对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的影响第154-156页
        6.5.4 猴头菇纯化多糖HEP-W对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、血清IL-2含量的影响第156-157页
        6.5.5 猴头菇纯化多糖HEP-W对免疫抑制小鼠抗氧化能力的影响第157-159页
    6.6 本章小结第159页
    参考文献第159-163页
结论与展望第163-166页
攻读博士学位期间取得的研究成果第166-168页
致谢第168-170页
附件第170页

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