| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 乳中的酪蛋白 | 第12-13页 |
| 1.1.1 酪蛋白的组成 | 第12页 |
| 1.1.2 酪蛋白的功能特性 | 第12-13页 |
| 1.2 人乳中的β-酪蛋白 | 第13-15页 |
| 1.2.1 人乳的重要性 | 第13页 |
| 1.2.2 β-酪蛋白的结构特性 | 第13-14页 |
| 1.2.3 β-酪蛋白的生物学功能 | 第14页 |
| 1.2.4 β-酪蛋白基因 | 第14-15页 |
| 1.3 生物信息学分析 | 第15-16页 |
| 1.3.1 基于序列的分析预测 | 第15页 |
| 1.3.2 分子系统学与分子进化 | 第15页 |
| 1.3.3 进化树的构建 | 第15-16页 |
| 1.4 Th1和Th2细胞的免疫调节作用 | 第16-17页 |
| 1.4.1 Th1和Th2细胞及其分泌的细胞因子 | 第16-17页 |
| 1.4.2 Th1/Th2平衡与疾病的关系 | 第17页 |
| 1.5 肠上皮细胞的免疫调节 | 第17-19页 |
| 1.5.1 小肠上皮细胞 | 第18页 |
| 1.5.2 小肠上皮细胞功能 | 第18页 |
| 1.5.3 细胞因子在肠炎症中的作用 | 第18-19页 |
| 1.6 蛋白质的分离纯化 | 第19-20页 |
| 1.6.1 常见的蛋白分离纯化方法 | 第19-20页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第20-23页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第20-22页 |
| 1.7.2 研究意义 | 第22-23页 |
| 1.8 技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-41页 |
| 2.1 材料与设备 | 第24-28页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株 | 第24页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第24页 |
| 2.1.4 质粒载体 | 第24-25页 |
| 2.1.5 实验所用试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.6 实验所用仪器和设备 | 第26-27页 |
| 2.1.7 实验所用试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-41页 |
| 2.2.1 人乳β-酪蛋白(CSN2)编码基因的克隆 | 第28-31页 |
| 2.2.2 人乳CSN2基因序列生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.2.3 原核表达载体质粒pET-30a-GST-CSN2的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.4 表达载体质粒pET-30a-GST-CSN2的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.2.5 重组蛋白的纯化及定量 | 第34-36页 |
| 2.2.6 重组蛋白及人乳β-酪蛋白的胰蛋白酶酶解 | 第36页 |
| 2.2.7 酶解产物刺激脾细胞增殖及细胞因子分泌 | 第36-38页 |
| 2.2.8 酶解产物刺激小肠上皮细胞增殖及细胞因子分泌 | 第38-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-61页 |
| 3.1 人乳β-酪蛋白编码基因的克隆 | 第41-43页 |
| 3.1.1 人乳腺组织总RNA提取 | 第41页 |
| 3.1.2 目的基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.1.3 人乳CSN2基因的纯化 | 第42页 |
| 3.1.4 阳性克隆pMD 19-T-CSN2的筛选 | 第42-43页 |
| 3.2 人乳CSN2基因序列生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.2.1 氨基酸序列的推导 | 第43-44页 |
| 3.2.2 人乳β-酪蛋白理化性质预测 | 第44页 |
| 3.2.3 人乳β-酪蛋白疏水性预测 | 第44-45页 |
| 3.2.4 β-酪蛋白进化分析 | 第45-46页 |
| 3.3 重组质粒pET-30a-GST-CSN2的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4 表达载体质粒pET-30a-GST-CSN2的诱导表达 | 第47-49页 |
| 3.4.1 诱导时间的优化 | 第47-48页 |
| 3.4.2 蛋白表达形式的确定 | 第48-49页 |
| 3.4.3 重组蛋白的纯化 | 第49页 |
| 3.5 酶解产物刺激脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌 | 第49-54页 |
| 3.5.1 HCSN2酶解产物刺激脾淋巴细胞增殖 | 第49-50页 |
| 3.5.2 重组HCSN2酶解产物刺激脾淋巴细胞增殖 | 第50-51页 |
| 3.5.3 HCSN2酶解产物对脾细胞分泌Th1和Th2细胞因子的影响 | 第51-53页 |
| 3.5.4 重组HCSN2酶解产物对脾细胞分泌Th1和Th2细胞因子的影响 | 第53-54页 |
| 3.6 酶解产物刺激小肠上皮细胞增殖及细胞因子分泌 | 第54-61页 |
| 3.6.1 小肠上皮细胞培养情况 | 第54-56页 |
| 3.6.2 HCSN2酶解产物刺激小肠上皮细胞增殖 | 第56页 |
| 3.6.3 重组HCSN2酶解产物刺激小肠上皮细胞增殖 | 第56-57页 |
| 3.6.4 HCSN2酶解产物对小肠上皮细胞分泌细胞因子的影响 | 第57-59页 |
| 3.6.5 重组HCSN2酶解产物对小肠上皮细胞分泌细胞因子的影响 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 4.1 人乳β-酪蛋白基因克隆表达 | 第61-62页 |
| 4.2 酶解产物刺激脾细胞增殖及细胞因子分泌 | 第62页 |
| 4.3 酶解产物刺激小肠上皮细胞增殖及细胞因子分泌 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
