| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一篇 詹氏甲烷球菌 NifH1 的初步晶体学研究 | 第10-47页 |
| 第一章 研究背景概述 | 第10-24页 |
| ·固氮作用 | 第10-12页 |
| ·氮的重要作用以及氮循环 | 第10-12页 |
| ·固氮的形式及意义 | 第12页 |
| ·固氮酶系统 | 第12-15页 |
| ·固氮机制 | 第15-16页 |
| ·固氮酶同源物 | 第16-20页 |
| ·詹氏甲烷球菌（Methanocaldococcus jannaschii）中NifH 蛋白的研究进展 | 第20-24页 |
| ·詹氏甲烷球菌简介 | 第20页 |
| ·Mj.NifH1 和Mj.NifD 在体内的表达情况 | 第20-21页 |
| ·Mj.NifH1 和Mj.NifH2 的介绍及对比 | 第21-22页 |
| ·Mj.NifH 和Mj.NifD 在进化上的重要意义 | 第22-23页 |
| ·Mj.NifH 结构生物学的研究意义及进展 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-32页 |
| ·质粒构建 | 第24-26页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·PCR 进行目的基因片段的扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物的回收、酶切以及连接到载体 | 第25页 |
| ·将连接产物转化到E.coli TOP10 菌株中 | 第25页 |
| ·质粒的抽提与鉴定 | 第25-26页 |
| ·PCR 和双酶切鉴定质粒 | 第26页 |
| ·目的蛋白的表达纯化 | 第26-30页 |
| ·先用5ml 的LB 小管小量培养以摸索表达条件 | 第27页 |
| ·扩大培养 | 第27页 |
| ·蛋白纯化 | 第27-30页 |
| ·晶体的筛选和优化 | 第30-31页 |
| ·蛋白质晶体生长原理 | 第30页 |
| ·晶体初筛 | 第30-31页 |
| ·晶体优化 | 第31页 |
| ·晶体X 射线衍射数据的收集和处理 | 第31-32页 |
| ·衍射数据收集 | 第31页 |
| ·结构解析 | 第31-32页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第32-42页 |
| ·Mj.NifH1 全长基因的克隆和质粒构建 | 第32页 |
| ·Mj.NifH1 的表达纯化 | 第32-34页 |
| ·小量表达以摸索表达条件的结果 | 第32页 |
| ·镍柱纯化的结果 | 第32-33页 |
| ·液相色谱层析的结果 | 第33-34页 |
| ·Mj.NifH1 的晶体生长 | 第34-36页 |
| ·Mj.NifH1 的晶体生长浓度条件摸索 | 第34-35页 |
| ·Mj.NifH1 的晶体初筛 | 第35页 |
| ·Mj.NifH1 的晶体优化 | 第35-36页 |
| ·Mj.NifH1 晶体结构的解析工作 | 第36-37页 |
| ·衍射数据收集 | 第36-37页 |
| ·晶体结构解析 | 第37页 |
| ·Mj.NifH1 蛋白性质分析 | 第37-42页 |
| ·动态光散射检测蛋白聚集状态 | 第37-38页 |
| ·原子吸收光谱检测Fe 元素 | 第38-42页 |
| 小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 第二篇 酿酒酵母 Ndl1 蛋白的初步晶体学研究 | 第47-69页 |
| 第一章 研究背景概述 | 第47-56页 |
| ·细胞周期简介 | 第47-48页 |
| ·有丝分裂过程 | 第48-50页 |
| ·动力蛋白的结构和功能 | 第50-52页 |
| ·动力蛋白的结构 | 第51页 |
| ·细胞质动力蛋白的功能 | 第51-52页 |
| ·Ndl1 蛋白在动力蛋白调控中的作用 | 第52-56页 |
| ·动力蛋白调控蛋白 | 第52页 |
| ·酿酒酵母Ndl1 的特征 | 第52-53页 |
| ·Ndl1 在细胞周期中的出现情况 | 第53-54页 |
| ·Ndl1 的功能 | 第54-56页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第56-60页 |
| ·质粒构建 | 第56页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第56-57页 |
| ·蛋白小量表达条件摸索 | 第56页 |
| ·扩大培养 | 第56页 |
| ·蛋白纯化 | 第56-57页 |
| ·晶体生长 | 第57页 |
| ·质粒改造 | 第57-59页 |
| ·设计质粒改造方法 | 第58页 |
| ·构建改造表达载体 | 第58-59页 |
| ·改造后重组蛋白的表达纯化 | 第59-60页 |
| 第三章 实验结果及讨论 | 第60-65页 |
| ·全长蛋白表达及纯化 | 第60-61页 |
| ·小量表达结果 | 第60页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第60-61页 |
| ·改造基因的克隆、蛋白表达和纯化 | 第61-62页 |
| ·改造基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·改造后重组蛋白Ndl1△79 的表达纯化 | 第62-64页 |
| ·Ndl1△79 的小量表达结果 | 第62页 |
| ·Ndl1△79 的纯化结果 | 第62-64页 |
| ·Ndl1△79 蛋白晶体生长 | 第64-65页 |
| 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 附录 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第75页 |
