磷脂酶D制备及催化反应的初步研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-22页 |
| ·研究问题的提出 | 第10页 |
| ·文献综述 | 第10-21页 |
| ·磷脂简介 | 第10-13页 |
| ·磷脂的结构及来源 | 第10-12页 |
| ·理化性质 | 第12页 |
| ·卵磷脂的应用 | 第12-13页 |
| ·磷脂的改性 | 第13-17页 |
| ·物理改性 | 第13-14页 |
| ·化学改性 | 第14-15页 |
| ·酶法改性 | 第15-17页 |
| ·有机相中的酶催化反应 | 第17-21页 |
| ·酶粉直接扩散 | 第17-18页 |
| ·酶的修饰 | 第18页 |
| ·固定化酶 | 第18-19页 |
| ·反胶团中的酶反应 | 第19-20页 |
| ·酶的表面活性剂包覆固定化 | 第20-21页 |
| ·本文研究的内容 | 第21-22页 |
| 第二章 磷脂酶D的分离提纯方法的研究 | 第22-31页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第22-24页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第22-23页 |
| ·实验所需材料 | 第23页 |
| ·试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·粗酶液的制备 | 第24页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第24-25页 |
| ·制定BSA标准曲线 | 第24-25页 |
| ·测定PLD发酵液蛋白质浓度 | 第25页 |
| ·磷脂酶D活性的检测 | 第25-26页 |
| ·对硝基酚标准曲线的绘制(pH=8) | 第25页 |
| ·磷脂酶D的水解活力的测定 | 第25页 |
| ·酶活力相关术语及定义 | 第25-26页 |
| ·提纯方法 | 第26-27页 |
| ·超滤法 | 第26页 |
| ·盐析法 | 第26页 |
| ·乙醇沉淀法 | 第26-27页 |
| ·聚乙二醇(PEG)沉淀法 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-29页 |
| ·超滤对磷脂酶D分离纯化的影响 | 第27页 |
| ·硫酸铵饱和度对磷脂酶D的影响 | 第27-28页 |
| ·乙醇用量对磷脂酶D分离纯化的影响 | 第28-29页 |
| ·聚乙二醇浓度对磷脂酶D分离纯化的影响 | 第29页 |
| ·小结 | 第29-31页 |
| 第三章 磷脂酶D性质的研究 | 第31-37页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-32页 |
| ·磷脂酶D最佳水解温度的测定 | 第31页 |
| ·磷脂酶D最佳水解反应PH值得测定 | 第31-32页 |
| ·酶的热稳定性测定 | 第32页 |
| ·酶的pH稳定性测定 | 第32页 |
| ·酶的保存稳定性 | 第32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-36页 |
| ·温度对酶水解反应的影响 | 第32-34页 |
| ·pH值对酶水解反应的影响 | 第34页 |
| ·酶的热稳定性研究 | 第34-35页 |
| ·酶的pH稳定性研究 | 第35页 |
| ·酶的保存稳定性研究 | 第35-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第四章 磷脂酶D吸附固定化的研究 | 第37-42页 |
| ·实验材料、试剂与设备 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·固定化酶的制备 | 第38页 |
| ·酶活力的测定方法 | 第38-39页 |
| ·磷脂酶D水解活力的检测 | 第38-39页 |
| ·磷脂酶D转磷脂酰活力的检测 | 第39页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第39页 |
| ·实验结果讨论 | 第39-41页 |
| ·TLC检测磷脂酶D水解结果的分析 | 第39-40页 |
| ·TLC检测磷脂酶D转磷脂酰活力结果分析 | 第40页 |
| ·不同吸附的固定化方法的比较 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第五章 表面活性剂的合成及酶固定化包覆的研究 | 第42-50页 |
| ·原理 | 第42-43页 |
| ·包覆剂的选择 | 第43-44页 |
| ·包覆剂的合成 | 第44-48页 |
| ·主要原料和仪器 | 第44页 |
| ·包覆剂的合成原理 | 第44-45页 |
| ·包覆剂的合成方法 | 第45-46页 |
| ·合成结果分析 | 第46-48页 |
| ·中间物谷氨酸二月桂醇酯的分析 | 第46-47页 |
| ·产物2C12GE的分析 | 第47-48页 |
| ·PLD表面活性剂包覆固定化的研究 | 第48-49页 |
| ·主要原料与仪器 | 第48页 |
| ·包覆固定化酶制备方法 | 第48页 |
| ·包覆酶中蛋白质含量的测定 | 第48-49页 |
| ·测定方法 | 第48页 |
| ·包覆酶中蛋白含量及包覆率的计算 | 第48-49页 |
| ·结果讨论 | 第49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第六章 游离及固定化磷脂酶D催化反应的研究 | 第50-59页 |
| ·实验仪器与材料 | 第50页 |
| ·酶催化反应实验方法 | 第50-51页 |
| ·水解反应 | 第50页 |
| ·转磷脂酰反应 | 第50-51页 |
| ·PG(磷脂酰甘油)的合成 | 第50-51页 |
| ·PE(磷脂酰乙醇胺)的合成 | 第51页 |
| ·游离酶、固定化酶及包覆固定化酶反应 | 第51页 |
| ·检测方法 | 第51-52页 |
| ·产物组成的测定 | 第51页 |
| ·转化程度的评价 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-58页 |
| ·PC水解反应研究 | 第52页 |
| ·PC转磷脂酰合成PG | 第52-53页 |
| ·PC转磷脂酰合成PE | 第53-54页 |
| ·酶的形式对转磷脂酰反应的影响 | 第54-55页 |
| ·磷脂酶D的酶促反应动力学的研究 | 第55-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
