| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 引言 | 第11-13页 |
| 1.2 甜味蛋白brazzein的研究概述 | 第13-14页 |
| 1.2.1 甜味蛋白brazzein的来源及分子结构 | 第13页 |
| 1.2.2 甜味蛋白brazzein的生化性质 | 第13-14页 |
| 1.2.3 甜味蛋白brazzein的开发前景 | 第14页 |
| 1.3 甜味蛋白brazzein的基因工程 | 第14-16页 |
| 1.3.1 甜味蛋白brazzein在原核生物中的表达 | 第15页 |
| 1.3.2 甜味蛋白brazzein在真菌中的表达 | 第15页 |
| 1.3.3 甜味蛋白brazzein在植物中的表达 | 第15-16页 |
| 1.3.4 甜味蛋白brazzein在哺乳动物中的表达 | 第16页 |
| 1.4 甜味蛋白brazzein甜味的决定因素 | 第16-17页 |
| 1.4.1 包含Arg43的弹性环周围的氨基酸残基 | 第16页 |
| 1.4.2 带电荷的氨基酸残基 | 第16-17页 |
| 1.4.3 N-末端和C-末端 | 第17页 |
| 1.4.4 其他的因素 | 第17页 |
| 1.5 研究意义及内容 | 第17-18页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第17-18页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第18页 |
| 1.6 研究技术路线 | 第18-21页 |
| 1.6.1 重组甜味蛋白brazzein的表达路线 | 第18-19页 |
| 1.6.2 甜味蛋白brazzein新型突变体分子构建 | 第19-21页 |
| 第2章 甜味蛋白brazzein基因在大肠杆菌中的表达 | 第21-39页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 菌株、质粒和酶 | 第22页 |
| 2.2.2 试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 实验溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2.2.4 培养基的配制 | 第24页 |
| 2.2.5 BL21感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.3 实验仪器 | 第25页 |
| 2.4 方法 | 第25-31页 |
| 2.4.1 甜味蛋白brazzein的克隆 | 第25-27页 |
| 2.4.2 甜味蛋白brazzein的表达 | 第27页 |
| 2.4.3 甜味蛋白brazzein的分离纯化 | 第27-28页 |
| 2.4.4 SUMO蛋白酶酶切实验 | 第28-29页 |
| 2.4.5 甜味蛋白brazzein的透析 | 第29页 |
| 2.4.6 甜味蛋白brazzein浓度的测定 | 第29-30页 |
| 2.4.7 甜味蛋白brazzein甜味阈值的测定 | 第30-31页 |
| 2.4.8 甜味蛋白brazzein热稳定性的测定 | 第31页 |
| 2.5 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.5.1 甜味蛋白brazzein的克隆 | 第31-32页 |
| 2.5.2 甜味蛋白brazzein的纯化分析 | 第32-33页 |
| 2.5.3 甜味蛋白brazzein的SUMO蛋白酶酶切结果分析 | 第33页 |
| 2.5.4 甜味蛋白brazzein透析结果 | 第33页 |
| 2.5.5 甜味蛋白质brazzein甜味阈值结果 | 第33-35页 |
| 2.5.6 甜味蛋白brazzein热稳定性实验结果 | 第35页 |
| 2.6 讨论 | 第35-36页 |
| 2.7 本章小结 | 第36-39页 |
| 第3章 甜味蛋白brazzein的单突变研究 | 第39-59页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 材料 | 第39-43页 |
| 3.2.1 菌株、质粒和酶 | 第39-40页 |
| 3.2.2 试剂 | 第40页 |
| 3.2.3 实验溶液的配制 | 第40-41页 |
| 3.2.4 DH5α感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| 3.2.5 镍柱琼脂糖树脂(Ni-NTAresin)再生 | 第42-43页 |
| 3.3 实验仪器 | 第43页 |
| 3.4 方法 | 第43-50页 |
| 3.4.1 甜味蛋白brazzein突变体的克隆 | 第43-48页 |
| 3.4.2 brazzein突变体基因的表达 | 第48页 |
| 3.4.3 brazzein突变体蛋白的酶切纯化 | 第48-49页 |
| 3.4.4 brazzein突变体蛋白的聚丙烯酰氨凝胶电泳分析 | 第49页 |
| 3.4.5 brazzein突变体蛋白甜味阈值的测定 | 第49页 |
| 3.4.6 野生型brazzein及其突变体蛋白二级结构的研究 | 第49-50页 |
| 3.5 结果与分析 | 第50-56页 |
| 3.5.1 甜味蛋白brazzein突变体的克隆 | 第50-51页 |
| 3.5.2 brazzein突变体蛋白的聚丙烯酰氨凝胶电泳结果 | 第51-52页 |
| 3.5.3 brazzein突变体蛋白的甜味阈值测定结果 | 第52-54页 |
| 3.5.4 brazzein及其突变体蛋白二级结构的分析 | 第54-56页 |
| 3.6 讨论 | 第56-57页 |
| 3.7 本章小结 | 第57-59页 |
| 第4章 brazzein的多突变研究 | 第59-71页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 材料 | 第59-63页 |
| 4.2.1 菌株、质粒和酶 | 第59-60页 |
| 4.2.2 试剂 | 第60页 |
| 4.2.3 实验溶液的配制 | 第60-61页 |
| 4.2.4 培养基的配制 | 第61-62页 |
| 4.2.5 感受态细胞的制备 | 第62-63页 |
| 4.3 实验仪器 | 第63页 |
| 4.4 方法 | 第63-64页 |
| 4.4.1 甜味蛋白brazzein突变体的克隆 | 第63-64页 |
| 4.4.2 甜味蛋白brazzein多重突变体的表达 | 第64页 |
| 4.4.3 甜味蛋白brazzein多重突变体蛋白的分离纯化 | 第64页 |
| 4.4.4 甜味蛋白brazzein突变体蛋白甜度的研究 | 第64页 |
| 4.4.5 野生型brazzein及其突变体蛋白二级结构的研究 | 第64页 |
| 4.5 结果与分析 | 第64-69页 |
| 4.5.1 甜味蛋白brazzein突变体的克隆 | 第64-65页 |
| 4.5.2 多重突变体蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第65-66页 |
| 4.5.3 甜味蛋白brazzein突变体分子模拟 | 第66-67页 |
| 4.5.4 甜味蛋白brazzein多突变体的甜度测定结果分析 | 第67-68页 |
| 4.5.5 野生型brazzein及其突变体蛋白二级结构的分析 | 第68-69页 |
| 4.6 讨论 | 第69-70页 |
| 4.7 本章小结 | 第70-71页 |
| 第5章 总结与展望 | 第71-73页 |
| 5.1 总结 | 第71页 |
| 5.2 展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 在校期间主要科研成果 | 第81页 |
