| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-15页 |
| 1.1 黏附分子的种类及功能 | 第10页 |
| 1.2 黏附分子对血管疾病产生的影响 | 第10-11页 |
| 1.3 RGD 治疗血管性疾病及肿瘤疾病研究进展 | 第11-13页 |
| 1.4 本实验室部分关于 RGD 模体蛋白抑制血管新生的相关研究 | 第13-14页 |
| 1.5 小结 | 第14-15页 |
| 2 rLj-RGD3(H~-)蛋白的基因克隆与表达 | 第15-25页 |
| 2.1 材料 | 第15页 |
| 2.2 方法 | 第15-20页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第15页 |
| 2.2.2 pET23b-RGD3 质粒提取 | 第15-16页 |
| 2.2.3 PCR 扩增获得目的片段 | 第16页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第16页 |
| 2.2.5 PCR 产物的纯化 | 第16-17页 |
| 2.2.6 载体构建 | 第17页 |
| 2.2.7 In-Fusion 及双酶切鉴定 | 第17-18页 |
| 2.2.8 重组质粒的转化与蛋白的诱导表达 | 第18-19页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE 电泳检测诱导表达结果 | 第19-20页 |
| 2.2.10 质谱检测 | 第20页 |
| 2.3 结果 | 第20-23页 |
| 2.3.1 pET23b-RGD3 的 PCR 扩增 | 第20-21页 |
| 2.3.2 载体构建 | 第21页 |
| 2.3.3 T7 通用引物法进行转化质粒的检测 | 第21-22页 |
| 2.3.4 目的蛋白的诱导表达 | 第22页 |
| 2.3.5 质谱检测 | 第22-23页 |
| 2.4 讨论 | 第23-24页 |
| 2.5 结论 | 第24-25页 |
| 3 rLj-RGD3(H~-)蛋白发酵生产中试工艺 | 第25-31页 |
| 3.1 材料 | 第25页 |
| 3.2 方法 | 第25-27页 |
| 3.2.1 菌种的选取 | 第25页 |
| 3.2.2 培养基的选取 | 第25-26页 |
| 3.2.3 中试发酵 | 第26-27页 |
| 3.3 结果 | 第27-30页 |
| 3.3.1 第一次培养菌种镜检 | 第27页 |
| 3.3.2 第二次培养菌种镜检 | 第27页 |
| 3.3.3 菌种的选取 | 第27-28页 |
| 3.3.4 培养基选取 | 第28页 |
| 3.3.5 发酵初试 | 第28-29页 |
| 3.3.6 发酵优化 | 第29-30页 |
| 3.4 讨论 | 第30页 |
| 3.5 结论 | 第30-31页 |
| 4 rLj-RGD3(H~-)蛋白纯化工艺 | 第31-51页 |
| 4.1 材料 | 第31页 |
| 4.2 方法 | 第31-37页 |
| 4.2.1 Bio-RAD 层析条件摸索 | 第31-33页 |
| 4.2.2 AKTA-pure 层析条件摸索 | 第33-37页 |
| 4.3 结果 | 第37-50页 |
| 4.3.1 Bio-RAD 层析系统 | 第37页 |
| 4.3.2 AKTA-pure 层析系统 | 第37-38页 |
| 4.3.3 BIO-RAD 层析条件 | 第38-40页 |
| 4.3.4 AKTA-pure 层析条件 | 第40-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50页 |
| 4.5 结论 | 第50-51页 |
| 5 去纯化标签 rLj-RGD3（H~-）的抗血栓及抗血管新生活性鉴定 | 第51-56页 |
| 5.1 材料 | 第51页 |
| 5.2 方法 | 第51-52页 |
| 5.2.1 rLj-RGD3（H~-）对大鼠动脉血栓形成的影响 | 第51页 |
| 5.2.2 rLj-RGD3（H~-）对大鼠静脉血栓形成的影响 | 第51-52页 |
| 5.2.3 rLj-RGD3（H~-）对血管新生的抑制作用 | 第52页 |
| 5.3 结果 | 第52-55页 |
| 5.3.1 静脉注射条件下，rLj-RGD3（H~-）蛋白对大鼠动脉血栓的抑制作用 | 第52-53页 |
| 5.3.2 静脉注射条件下，rLj-RGD3（H~-）对大鼠静脉血栓的抑制强度与使用剂量之间的关系 | 第53-54页 |
| 5.3.3 rLj-RGD3（H~-）对血管新生的影响 | 第54-55页 |
| 5.4 讨论 | 第55页 |
| 5.5 结论 | 第55-56页 |
| 6 制剂研究 | 第56-64页 |
| 6.1 材料 | 第56页 |
| 6.2 方法 | 第56-57页 |
| 6.2.1 所需溶液的配制 | 第56页 |
| 6.2.2 目的蛋白的初提 | 第56页 |
| 6.2.3 加入维生素 C 对蛋白纯度的影响 | 第56页 |
| 6.2.4 加入不同的保护剂对蛋白纯度的影响 | 第56-57页 |
| 6.2.5 同时加入维生素 C 与不同的保护剂对蛋白纯度的影响 | 第57页 |
| 6.3 结果 | 第57-63页 |
| 6.3.1 目的蛋白的初提 | 第57-58页 |
| 6.3.2 维生素 C 对蛋白纯度的影响 | 第58-60页 |
| 6.3.3 不同保护剂孵育对蛋白纯度的影响 | 第60-62页 |
| 6.3.4 同时加入维生素 C 与保护剂对蛋白纯度的影响 | 第62-63页 |
| 6.4 讨论 | 第63页 |
| 6.5 结论 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
