| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩说明 | 第10-11页 |
| 菌种名称对照表 | 第11-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-24页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 肝脏移植与大环内脂类免疫抑制剂 | 第16-18页 |
| 1.2.1 国内肝脏移植发展现状 | 第16-17页 |
| 1.2.2 免疫抑制剂的研究概况 | 第17-18页 |
| 1.3 FK506研究概况 | 第18-21页 |
| 1.3.1 FK506的基本结构 | 第18-19页 |
| 1.3.2 FK506的理化性质 | 第19页 |
| 1.3.3 FK506的作用机理与免疫抑制活性 | 第19-20页 |
| 1.3.4 FK506的生物合成 | 第20页 |
| 1.3.5 FK506的发酵工艺现状 | 第20-21页 |
| 1.4 FK506产生菌代谢途径改造 | 第21-23页 |
| 1.5 立题依据 | 第23页 |
| 1.6 研究内容 | 第23-24页 |
| 第2章 FK506基因工程菌株构建 | 第24-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 实验药品 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验化学试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 主要试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 FK506产生菌基因组抽提 | 第26-27页 |
| 2.2.2 感受态细胞制备 | 第27页 |
| 2.2.3 质粒抽提 | 第27页 |
| 2.2.4 目标片段凝胶回收 | 第27页 |
| 2.2.5 pSET152线性载体制备 | 第27页 |
| 2.2.6 目的基因功能 | 第27-28页 |
| 2.2.7 基因过表达载体构建 | 第28页 |
| 2.2.8 接合转移 | 第28-30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-38页 |
| 2.3.1 出发菌株SIPI-001 的菌种验证 | 第30页 |
| 2.3.2 pSET152-fkbR、pSET152-fkbDM、pSET152-tcsC质粒设计 | 第30-32页 |
| 2.3.3 目的基因片段扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.4 酶切验证fkbR、fkbDM、tcsC片段 | 第33页 |
| 2.3.5 质粒pSET152 Erm*E线性载体制备 | 第33-34页 |
| 2.3.6 pSET152-fkbR、pSET152-fkbDM、pSET152-tcsC质粒验证 | 第34-35页 |
| 2.3.7 SIPI-fkbR、SIPI-fkbDM、SIPI-tcsC基因工程菌株构建 | 第35-36页 |
| 2.3.8 SIPI-fkbR、SIPI-fkbDM、SIPI-tcsC工程菌基因及发酵水平验证 | 第36-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-40页 |
| 第3章 FK506工程菌活化及高产菌株发现 | 第40-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-43页 |
| 3.1.1 菌株来源 | 第40页 |
| 3.1.2 培养基 | 第40-41页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 3.2.1 培养条件 | 第43页 |
| 3.2.2 分析方法 | 第43-44页 |
| 3.2.3 菌种活化 | 第44页 |
| 3.2.4 自然分离方法 | 第44页 |
| 3.2.5 传代稳定性 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-48页 |
| 3.3.1 菌种筛选 | 第45页 |
| 3.3.2 工程菌自然分离实验 | 第45-46页 |
| 3.3.3 高产菌株传代稳定性实验 | 第46-47页 |
| 3.3.4 菌株的形态观测 | 第47-48页 |
| 3.4 本章小结及讨论 | 第48-50页 |
| 第4章 SIPI-FK005 发酵工艺优化 | 第50-80页 |
| 4.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 菌株来源 | 第50页 |
| 4.1.2 培养基 | 第50页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.4 主要实验仪器 | 第51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.2.1 培养基优化 | 第51-53页 |
| 4.2.2 培养条件优化 | 第53-54页 |
| 4.2.3 发酵参数测定 | 第54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-79页 |
| 4.3.1 种子培养基的初步优化 | 第54-57页 |
| 4.3.2 发酵培养基的优化 | 第57-67页 |
| 4.3.3 发酵培养基营养物质综合考察 | 第67-72页 |
| 4.3.4 FK506产生菌的培养条件优化 | 第72-79页 |
| 4.4 本章小结 | 第79-80页 |
| 第5章 FK506发酵罐工艺优化 | 第80-84页 |
| 5.1 实验材料 | 第80页 |
| 5.2 实验方法 | 第80页 |
| 5.2.1 菌种培养条件 | 第80页 |
| 5.2.2 分析方法 | 第80页 |
| 5.2.3 罐发酵条件 | 第80页 |
| 5.3 实验结果 | 第80-83页 |
| 5.3.1 摇瓶发酵工艺在发酵罐中的应用 | 第80-81页 |
| 5.3.2 发酵罐中添加补料对FK506产生水平的影响 | 第81-82页 |
| 5.3.3 FK506产生水平在发酵罐及摇瓶发酵过程对比 | 第82-83页 |
| 5.4 本章小结及讨论 | 第83-84页 |
| 全文总结 | 第84-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、专利申请 | 第86-88页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 附录 | 第98页 |
