| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩写说明 | 第9-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 多肽类药物研发现状 | 第13页 |
| 1.2 GLP-1 类多肽药物长效策略 | 第13-17页 |
| 1.2.1 GLP-1 简介 | 第13-15页 |
| 1.2.2 多肽药物的长效开发策略 | 第15-17页 |
| 1.3 新型多肽融合片段 | 第17-20页 |
| 1.3.1 SABA血清白蛋白结合分子 | 第17-18页 |
| 1.3.2 XTEN长效序列 | 第18-19页 |
| 1.3.3 PAS长效序列 | 第19-20页 |
| 1.4 重组蛋白的表达 | 第20-21页 |
| 1.4.1 表达宿主的选择 | 第20页 |
| 1.4.2 目的蛋白表达形式 | 第20-21页 |
| 1.4.3 诱导条件 | 第21页 |
| 1.5 重组蛋白的分离纯化技术 | 第21-23页 |
| 1.5.1 超滤 | 第22页 |
| 1.5.2 离子交换色谱 | 第22-23页 |
| 1.5.3 分子排阻层析 | 第23页 |
| 1.5.4 亲和层析 | 第23页 |
| 1.5.5 高效液相层析 | 第23页 |
| 1.6 多肽药物的体外生物活性测试方法 | 第23-25页 |
| 1.6.1 分子水平检测多肽药物的生物活性 | 第23-24页 |
| 1.6.2 细胞水平检测多肽药物的生物活性 | 第24-25页 |
| 1.7 立题依据 | 第25-27页 |
| 第2章 长效GLP-1 融合蛋白的设计和表达 | 第27-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 物料 | 第27页 |
| 2.1.2 溶液与培养基配制 | 第27-28页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第28页 |
| 2.2 序列设计 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-30页 |
| 2.3.1 融合蛋白的表达 | 第29-30页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE检测融合蛋白的表达 | 第30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-32页 |
| 2.4.1 序列设计 | 第30页 |
| 2.4.2 表达鉴定 | 第30-32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-33页 |
| 2.6 本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 长效GLP-1 融合蛋白的发酵及诱导优化 | 第34-48页 |
| 3.1 SABA-GLP-1 融合蛋白的发酵与诱导优化 | 第34-40页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第34-35页 |
| 3.1.3 结果与分析 | 第35-40页 |
| 3.2 XTEN-GLP-1 融合蛋白的发酵与诱导优化 | 第40-44页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 3.2.3 结果与分析 | 第41-44页 |
| 3.3 PAS-GLP-1 融合蛋白的发酵与诱导优化 | 第44-46页 |
| 3.3.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.3.2 实验方法 | 第44页 |
| 3.3.3 结果与分析 | 第44-46页 |
| 3.4 本章结果 | 第46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-47页 |
| 3.6 本章小结 | 第47-48页 |
| 第4章 SABA-GLP-1 融合蛋白的复性与纯化鉴定 | 第48-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 菌株 | 第48页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.2.1 SABA-GLP-1 融合蛋白的表达 | 第49页 |
| 4.2.2 SABA-GLP-1 包涵体的提取 | 第49页 |
| 4.2.3 SABA-GLP-1 包涵体的洗涤探索 | 第49页 |
| 4.2.4 SABA-GLP-1 融合蛋白的变性 | 第49-50页 |
| 4.2.5 SABA-GLP-1 融合蛋白的复性 | 第50页 |
| 4.2.6 SABA-GLP-1 融合蛋白的复性优化 | 第50页 |
| 4.2.7 SABA-GLP-1 融合蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 4.2.8 SABA-GLP-1 融合蛋白的检测和分析 | 第51-52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-57页 |
| 4.3.1 SABA-GLP-1 融合蛋白的洗涤 | 第52-53页 |
| 4.3.2 SABA-GLP-1 融合蛋白的变性和复性 | 第53页 |
| 4.3.3 SABA-GLP-1 融合蛋白复性条件的优化 | 第53-54页 |
| 4.3.4 SABA-GLP-1 融合蛋白复性液的纯化 | 第54-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第5章 XTEN- GLP-1 和PAS-GLP-1 融合蛋白的纯化与酶切 | 第59-68页 |
| 5.1 实验材料 | 第59页 |
| 5.1.1 菌株 | 第59页 |
| 5.1.2 实验材料 | 第59页 |
| 5.2 实验方法 | 第59-63页 |
| 5.2.1 XTEN-GLP-1 和PAS-GLP-1 融合蛋白的表达 | 第59-60页 |
| 5.2.2 XTEN-GLP-1 和PAS-GLP-1 融合蛋白的提取 | 第60页 |
| 5.2.3 XTEN-GLP-1 和PAS-GLP-1 融合蛋白的纯化 | 第60-62页 |
| 5.2.4 XTEN-GLP-1 和PAS-GLP-1 融合蛋白的检测和分析 | 第62页 |
| 5.2.5 XTEN-GLP-1 和PAS-GLP-1 融合蛋白的酶切及纯化 | 第62-63页 |
| 5.3 结果与分析 | 第63-66页 |
| 5.3.1 XTEN-GLP-1 和PAS-GLP-1 融合蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| 5.3.2 XTEN-GLP-1 和PAS-GLP-1 融合蛋白的分析检测 | 第64-65页 |
| 5.3.3 酶切及酶切后纯化 | 第65-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66页 |
| 5.5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第6章 长效GLP-1 融合蛋白的生物活性检测 | 第68-76页 |
| 6.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 6.1.1 实验细胞 | 第68页 |
| 6.1.2 仪器 | 第68页 |
| 6.1.3 实验试剂 | 第68-69页 |
| 6.1.4 实验材料 | 第69页 |
| 6.1.5 培养基和试剂配制 | 第69页 |
| 6.2 实验原理 | 第69页 |
| 6.3 实验方法 | 第69-71页 |
| 6.3.1 检测细胞的复苏和传代培养 | 第69-70页 |
| 6.3.2 长效GLP-1 融合蛋白的生物活性检测 | 第70-71页 |
| 6.4 结果与分析 | 第71-74页 |
| 6.4.1 复苏GLP1R-CRE-bla CHO-K1细胞结果 | 第71页 |
| 6.4.2 长效GLP-1 融合蛋白的生物活性检测分析 | 第71-74页 |
| 6.5 讨论 | 第74-75页 |
| 6.6 本章小结 | 第75-76页 |
| 全文总结 | 第76-78页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、专利申请 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
