| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-20页 |
| 1.1 黄原胶 | 第8-10页 |
| 1.1.1 黄原胶的分子结构 | 第8-9页 |
| 1.1.2 黄原胶的理化性质 | 第9页 |
| 1.1.3 黄原胶生物合成中所需的酶类 | 第9-10页 |
| 1.2 野油菜黄单胞菌 | 第10页 |
| 1.3 乙酰化酶 | 第10-11页 |
| 1.3.1 乙酰化酶概述 | 第10-11页 |
| 1.3.2 乙酰化酶的生物学功能 | 第11页 |
| 1.3.3 乙酰化酶与黄原胶 | 第11页 |
| 1.4 研究基因功能的方法 | 第11-18页 |
| 1.4.1 生物信息学分析 | 第11-12页 |
| 1.4.2 表达谱分析 | 第12-13页 |
| 1.4.3 功能获得策略 | 第13-14页 |
| 1.4.4 功能失活策略 | 第14-18页 |
| 1.5 本课题的研究内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 研究意义与目的 | 第18页 |
| 1.5.2 实验内容 | 第18-20页 |
| 第二章 乙酰化酶基因的克隆及序列分析 | 第20-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 试剂 | 第20-24页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第24-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 菌的活化、培养与保藏 | 第28页 |
| 2.2.2 基因组DNA的提取与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR扩增目的片段 | 第29-30页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 构建重组质粒 | 第31-32页 |
| 2.2.6 重组质粒的转化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 转化子的蓝白筛选 | 第33页 |
| 2.2.8 转化子的鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.9 保藏菌种 | 第35页 |
| 2.2.10 测序 | 第35页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第35-39页 |
| 2.3.1 基因组DNA提取结果 | 第35-36页 |
| 2.3.2 目的片段PCR扩增结果 | 第36页 |
| 2.3.3 蓝白菌落的结果 | 第36-37页 |
| 2.3.4 阳性克隆鉴定结果 | 第37-39页 |
| 2.3.5 测序结果及序列分析 | 第39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 乙酰化酶基因的敲除及验证 | 第40-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第40页 |
| 3.1.2 试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1 菌的活化、培养与保藏 | 第42页 |
| 3.2.2 酶切重组质粒获得乙酰化酶基因的EcoRI酶切片段 | 第42-43页 |
| 3.2.3 酶切pK18mobSac B质粒获得EcoRI酶切片段 | 第43-44页 |
| 3.2.4 构建重组自杀性质粒载体 | 第44页 |
| 3.2.5 制备野油菜黄单胞菌CICC 10258感受态细胞 | 第44-45页 |
| 3.2.6 突变体的获得 | 第45页 |
| 3.2.7 突变体的验证 | 第45-47页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第47-51页 |
| 3.3.1 酶切回收的pK18mobSac B质粒结果 | 第47页 |
| 3.3.2 重组自杀性质粒载体的构建结果 | 第47-49页 |
| 3.3.3 突变体的获得 | 第49-50页 |
| 3.3.4 突变体的验证 | 第50-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 突变体遗传特性的检测 | 第52-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-55页 |
| 4.1.1 菌株 | 第52页 |
| 4.1.2 试剂 | 第52-54页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第54-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 突变体生长特征的分析 | 第55页 |
| 4.2.2 黄原胶产量的检测 | 第55-56页 |
| 4.2.3 胞外酶活性的检测 | 第56-57页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第57-61页 |
| 4.3.1 突变体的生长特征 | 第57-58页 |
| 4.3.2 黄原胶产量的检测结果 | 第58-59页 |
| 4.3.3 胞外酶活性的检测结果 | 第59-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-63页 |
| 结论与建议 | 第63-64页 |
| 1 结论 | 第63页 |
| 2 建议 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录A pK18mobSac B质粒上KanR基因的碱基序列 | 第70-71页 |
| 附录B 突变体的乙酰化酶基因的碱基序列 | 第71页 |
