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分泌广谱抗菌肽乳酸菌的筛选及高效表达的调控研究

摘要第1-5页
Abstract第5-17页
第1章 绪论第17-32页
   ·课题背景及研究的目的和意义第17-18页
   ·广谱抗菌肽高产菌株的筛选第18-21页
   ·抗菌肽的生物合成途径研究第21页
   ·代谢调控实现抗菌肽的高效表达第21-22页
   ·培养环境优化提高抗菌肽产量第22-23页
   ·乳酸菌抗菌肽基因工程研究第23-24页
   ·乳酸菌生产细菌素发酵过程优化与控制第24-25页
   ·抗菌肽的提取纯化研究第25-27页
   ·提高抗菌肽活性的方法研究第27-28页
   ·抗菌肽的抑菌机理研究第28-29页
   ·抗菌肽对革兰氏阴性菌和真菌的相关研究第29-30页
   ·乳酸菌抗菌肽开发存在的问题及发展前景第30-31页
   ·本文的主要研究内容第31-32页
第2章 试验材料与方法第32-52页
   ·试验材料第32-34页
     ·仪器与设备第32-33页
     ·试剂与药品第33-34页
     ·发酵食品与指示菌来源第34页
   ·产ClassⅡa细菌素乳酸菌的筛选方法第34-39页
     ·传统发酵食品的采集第34页
     ·采集样品中微生物的镜检第34-35页
     ·采集样品中乳酸菌的分离第35页
     ·96 孔板-酶标仪法第35页
     ·Colony-PCR法第35-37页
     ·琼脂扩散法第37页
     ·细菌素活力测定方法第37页
     ·产ClassⅡa细菌素乳酸菌的鉴定第37-39页
   ·Bac-J23 的纯化方法第39-43页
     ·Bradford试剂盒测定蛋白质含量第39-40页
     ·NH4SO_4 盐析法沉淀Bac-J23第40页
     ·菌体细胞吸附纯化Bac-J23第40-41页
     ·阳离子交换法分离纯化Bac-J23第41页
     ·疏水层析法分离纯化Bac-J23第41-42页
     ·Bac-J23 纯度的测定第42-43页
   ·Bac-J23 的理化特性及生物信息学分析第43-47页
     ·Bac-J23 氨基酸组成分析第43-44页
     ·Bac-J23 的N端序列分析第44页
     ·细菌素Bac-J23 的热特性第44-45页
     ·细菌素Bac-J23 的酸碱稳定性第45页
     ·细菌素Bac-J23 的蛋白酶敏感性第45页
     ·细菌素Bac-J23 的等电点测定第45-46页
     ·细菌素Bac-J23 的疏水性/亲水性分析第46页
     ·细菌素Bac-J23 的紫外可见光谱扫描分析第46页
     ·细菌素Bac-J23 的巯基和S-S键含量测定第46-47页
     ·细菌素Bac-J23 的亚细胞定位分析第47页
     ·细菌素Bac-J23 蛋白质序列的跨膜区预测第47页
     ·细菌素Bac-J23 同源性分析第47页
   ·Bac-J23 的合成调控研究第47-52页
     ·菌株生长和Bac-J23 合成曲线第47页
     ·接种量对细菌素Bac-J23 合成的影响第47页
     ·静息细胞体系的建立及静息细胞的制备第47-48页
     ·菌体总核酸(CNA)的测定第48页
     ·菌体干重(DCW)的测定第48页
     ·培养基组分及培养条件的优化第48-49页
     ·群感效应系统(QS)的初步确认第49页
     ·Bac-J23 的合成诱导研究第49-50页
     ·Bac-J23 的有限水解修饰第50-52页
第3章 产ClassⅡa细菌素乳酸菌高通量筛选与鉴定第52-69页
   ·引言第52-53页
   ·传统发酵食品中微生态系统的初步镜检第53-55页
   ·采集样品中乳酸菌的的初步分离第55-56页
     ·各样品最佳稀释度和培养基的选择第55页
     ·各样品中乳酸菌的初步分离第55-56页
   ·产ClassⅡa细菌素乳酸菌的筛选第56-62页
     ·琼脂孔扩散法筛选产细菌素乳酸菌第56-58页
     ·96 孔平板法筛选目标菌株第58页
     ·Colony--PCR筛选产ClassⅡa细菌素乳酸菌第58-62页
   ·产ClassⅡa细菌素乳酸菌的鉴定第62-67页
     ·Biolog微生物鉴定系统鉴定菌株J23第62-65页
     ·利用16SrDNA序列鉴定菌株J23第65-67页
   ·本章小结第67-69页
第4章 Bac-J23 的分离纯化研究第69-81页
   ·引言第69-70页
   ·蛋白质测定标准曲线的绘制第70页
   ·盐析法分离纯化Bac-J23第70-71页
   ·菌体细胞吸附分离纯化Bac-J23第71-72页
     ·pH对菌体细胞吸附Bac-J23 的影响第71-72页
     ·产生菌J23 细胞吸附纯化Bac-J23第72页
   ·阳离子交换法分离纯化Bac-J23第72-74页
     ·pH对Bac-J23 的纯化效果的影响第72-73页
     ·SP-Sepharose Fast Flow 分离纯化Bac-J23第73-74页
   ·疏水层析法分离纯化Bac-J23第74-75页
   ·细菌素Bac-J23 的纯度鉴定及N端序列分析第75-80页
     ·Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定Bac-J23 纯度与分子量第75-76页
     ·HPLC鉴定Bac-J23 纯度第76-77页
     ·Bac-J23 的N端序列分析第77-80页
   ·本章小结第80-81页
第5章 Bac-J23 的理化性质及生物信息学分析第81-94页
   ·引言第81-82页
   ·Bac-J23 的氨基酸组成分析第82-84页
     ·Bac-J23 氨基酸组成分析结果第82-83页
     ·Bac-J23 等电点和消光系数预测第83-84页
   ·Bac-J23 的热力学特性研究第84-86页
     ·升温速率的优化第84-86页
     ·Bac-J23 的热特性研究第86页
   ·Bac-J23 的酸碱稳定性研究第86-87页
   ·Bac-J23 的酶敏感性研究第87页
   ·细菌素Bac-J23 的等电点测定第87-88页
   ·Bac-J23 的疏水性/亲水性分析第88页
   ·Bac-J23 的紫外可见光谱扫描分析第88-89页
   ·Bac-J23 中巯基和S-S键含量测定第89页
   ·Bac-J23 的亚细胞定位预测分析第89-90页
   ·Bac-J23 的跨膜区预测第90-91页
   ·Bac-J23 的同源性分析第91-93页
   ·本章小结第93-94页
第6章 Bac-J23 的合成调控及应用影响因素研究第94-117页
   ·引言第94-95页
   ·培养条件对Bac-J23 合成的影响第95-98页
     ·菌株生长与Bac-J23 合成进程的关系第95页
     ·接种量对Bac-J23 合成的影响第95-96页
     ·温度对Bac-J23 合成的影响第96-97页
     ·pH对细菌素合成的影响第97-98页
   ·培养基组分对Bac-J23 合成的影响及优化第98-106页
     ·碳源对Bac-J23 合成的影响第98-99页
     ·氮源对Bac-J23 合成的影响第99-100页
     ·KH_2PO_4 对Bac-J23 合成的影响第100-101页
     ·MgSO_4 对Bac-J23 合成的影响第101页
     ·MnSO_4 对Bac-J23 合成的影响第101-102页
     ·Tween-80 对Bac-J23 合成的影响第102-103页
     ·响应面试验优化Bac-J23 合成条件第103-106页
   ·Bac-J23 合成的诱导调控研究第106-115页
     ·Lactobacillus paracasei基因组中群感效应系统的初步确认第106-107页
     ·发酵体系中诱导因子及其诱导作用的研究第107-109页
     ·外源因子对Bac-J23 合成诱导的研究第109-113页
     ·环境胁迫效应诱导合成Bac-J23第113-115页
   ·本章小结第115-117页
第7章 有限水解修饰及食品环境对Bac-J23 活性影响第117-125页
   ·引言第117页
   ·Bac-J23 的酶解产物分析第117-118页
   ·Bac-J23 及其酶解产物与敏感菌细胞的结合研究第118-119页
   ·Bac-J23 及其酶解产物的抗菌活力第119页
   ·食品成分和食品相关环境对Bac-J23 活性的影响第119-123页
     ·酪蛋白对Bac-J23 抗菌活性的影响第119-120页
     ·卵磷脂对Bac-J23 抗菌活性的影响第120-121页
     ·EDTA对Bac-J23 抗菌活力的影响第121页
     ·NaCl对Bac-J23 合成及活性的影响第121-122页
     ·乙醇对Bac-J23 活性的影响第122-123页
   ·Bac-J23 的贮存稳定性分析第123-124页
   ·本章小结第124-125页
结论第125-126页
展望第126-127页
参考文献第127-140页
攻读博士学位期间发表的论文及其它成果第140-143页
致谢第143-144页
个人简历第144页

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