| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-26页 |
| 1 重链抗体的发现及其结构特点 | 第18-21页 |
| 1.1 重链抗体的发现 | 第18页 |
| 1.2 常规抗体与重链抗体的结构 | 第18-21页 |
| 2 驼源VHH抗体及其生物学特性 | 第21-22页 |
| 2.1 分子小 | 第21页 |
| 2.2 溶解性高、稳定性强 | 第21页 |
| 2.3 靶向性和穿透力强 | 第21-22页 |
| 2.4 免疫原性弱、易于人源化 | 第22页 |
| 2.5 易生产 | 第22页 |
| 3 驼源VHH抗体的应用现状 | 第22-25页 |
| 3.1 VHH作为食品安全检测试剂的应用 | 第23页 |
| 3.2 VHH作为诊断工具的应用 | 第23-24页 |
| 3.2.1 VHH作为分子成像工具的应用 | 第23页 |
| 3.2.2 VHH作为免疫传感器的应用 | 第23-24页 |
| 3.3 VHH在疾病治疗中的应用 | 第24-25页 |
| 3.3.1 VHH在肿瘤疾病中的应用 | 第24页 |
| 3.3.2 VHH在感染性疾病中的应用 | 第24-25页 |
| 4 研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 抗腹泻免疫驼乳的制备及特异性IgGs抗原结合活性间接ELISA检测方法的建立 | 第26-65页 |
| 1 引言 | 第26-27页 |
| 2 试验材料与方法 | 第27-38页 |
| 2.1 试验材料及设备 | 第27-30页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第27页 |
| 2.1.2 抗原菌株的选择 | 第27页 |
| 2.1.3 试验主要试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.4 试验主要仪器设备 | 第29页 |
| 2.1.5 试验主要溶液配制 | 第29-30页 |
| 2.2 试验方法 | 第30-38页 |
| 2.2.1 灭活疫苗的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.2 灭活疫苗动物安全性测试 | 第31页 |
| 2.2.3 免疫流程 | 第31页 |
| 2.2.4 样品的采集与预处理 | 第31-32页 |
| 2.2.5 驼乳清与血清中总IgG的分离纯化 | 第32页 |
| 2.2.6 驼乳清与血清中各IgG亚型的分离纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE检测 | 第33-34页 |
| 2.2.8 BCA蛋白定量 | 第34页 |
| 2.2.9 酶标兔抗驼总IgG、IgG1、IgG2多克隆抗体的制备与蛋白含量的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.10 鼠抗驼IgG3杂交瘤细胞株的复苏 | 第35-36页 |
| 2.2.11 间接ELISA法测定免疫驼乳与血清相对效价 | 第36页 |
| 2.2.12 间接ELISA方法的条件优化 | 第36-38页 |
| 2.2.13 纯化样品效价的检测 | 第38页 |
| 2.2.14 数据分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-58页 |
| 3.1 驼乳清与血清中各IgG亚型的分离纯化结果 | 第38-40页 |
| 3.1.1 驼乳清与血清中总IgG的分离纯化结果 | 第38-39页 |
| 3.1.2 驼乳清与血清中各IgG亚型的分离纯化结果 | 第39-40页 |
| 3.2 驼乳清与血清中各纯化IgG亚型的SDS-PAGE鉴定结果 | 第40-42页 |
| 3.3 酶标兔抗驼总IgG、IgG1、IgG2多克隆抗体效价的测定 | 第42-43页 |
| 3.4 鼠抗驼IgG3杂交瘤细胞株的复苏 | 第43页 |
| 3.5 免疫乳清与血清相对效价的测定 | 第43-44页 |
| 3.6 驼乳清与血清各纯化IgG亚型蛋白含量的测定 | 第44-45页 |
| 3.7 间接ELISA方法的条件优化 | 第45-55页 |
| 3.7.1 最佳二抗工作浓度的确定 | 第46页 |
| 3.7.2 各纯化IgG相对效价的测定结果 | 第46-49页 |
| 3.7.3 抗原及一抗最佳工作浓度 | 第49-54页 |
| 3.7.4 最佳封闭条件的确定 | 第54-55页 |
| 3.8 纯化各IgG亚型与混合菌液以及单菌液结合活性的测定结果 | 第55-58页 |
| 4 讨论 | 第58-65页 |
| 4.1 关于免疫驼乳的制备 | 第58-59页 |
| 4.2 关于免疫驼乳清及血清各IgG亚型的分离纯化、鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3 关于免疫乳清及血清各纯化IgG亚型蛋白含量的测定 | 第60-61页 |
| 4.4 关于兔抗驼IgG多克隆抗体的制备 | 第61-62页 |
| 4.5 关于间接ELISA检测特异性抗体活性方法的建立 | 第62-63页 |
| 4.6 关于间接ELISA检测免疫驼乳清和血清各纯化IgG亚型的效价 | 第63-65页 |
| 第三章 抗腹泻免疫驼乳与血清各纯化IgG亚型理化稳定性的研究 | 第65-100页 |
| 1 引言 | 第65页 |
| 2 试验材料与设备 | 第65-70页 |
| 2.1 试验材料 | 第65页 |
| 2.2 试验试剂 | 第65-66页 |
| 2.3 试验主要设备 | 第66-67页 |
| 2.4 试验方法 | 第67-70页 |
| 2.4.1 抗原结合能力的检测 | 第67页 |
| 2.4.2 不同温度对各纯化IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第67页 |
| 2.4.3 各纯化IgG亚型抗原结合动力学以及热力学参数的分析 | 第67-68页 |
| 2.4.4 不同pH对各纯化IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第68-69页 |
| 2.4.5 糖醇化合物对各IgG亚型抗原结合能力的保护作用 | 第69页 |
| 2.4.6 胃蛋白酶水解对各纯化IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第69页 |
| 2.4.7 胰蛋白酶水解对各纯化IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第69页 |
| 2.4.8 SDS-PAGE检测酶解物 | 第69-70页 |
| 2.4.9 数据分析 | 第70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-95页 |
| 3.1 不同温度对各纯化IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第70-72页 |
| 3.2 不同温度下免疫驼乳清及血清各纯化IgG亚型抗原结合动力学及热力学分析 | 第72-83页 |
| 3.2.1 各纯化IgG亚型抗原结合动力学方程的确定 | 第72-77页 |
| 3.2.2 各纯化IgG亚型热变性过程中的D值与Z值的确定 | 第77-80页 |
| 3.2.3 不同温度下各纯化IgG亚型热力学参数的确定 | 第80-82页 |
| 3.2.4 几种常见杀菌温度处理下各纯化IgG亚型的抗原结合活性的损失率 | 第82-83页 |
| 3.3 不同pH对各纯化IgG亚型的抗原结合能力的影响 | 第83-85页 |
| 3.4 糖醇对各纯化IgG亚型的抗原结合能力的保护作用 | 第85-89页 |
| 3.4.1 糖醇对加热处理的各纯化IgG亚型的抗原结合能力的保护作用 | 第85-87页 |
| 3.4.2 糖醇对低pH处理的各纯化IgG亚型的抗原结合能力的保护作用 | 第87-89页 |
| 3.5 胃蛋白酶水解对各纯化IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第89-91页 |
| 3.6 胰蛋白酶水解对各纯化IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第91-93页 |
| 3.7 SDS-PAGE检测各纯化IgG亚型的酶解物 | 第93-95页 |
| 4 讨论 | 第95-100页 |
| 4.1 关于不同温度对各IgG亚型抗原结合能力的影响及其抗原结合动力学 | 第95-98页 |
| 4.1.1 关于不同温度对各IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第95-97页 |
| 4.1.2 关于不同温度对各IgG亚型抗原结合动力学及热力学参数 | 第97-98页 |
| 4.2 关于不同pH对各IgG亚型抗原结合能力的影响 | 第98页 |
| 4.3 关于糖醇化合物对各IgG亚型抗原结合保护作用的影响 | 第98-99页 |
| 4.4 关于不同酶对各IgG亚型抗原结合活性的影响 | 第99-100页 |
| 第四章 免疫与未免疫驼乳清IgGs体外抑菌效果及其对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的保护作用 | 第100-134页 |
| 1 引言 | 第100-101页 |
| 2 材料与方法 | 第101-111页 |
| 2.1 材料 | 第101-103页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第101页 |
| 2.1.2 试验菌株 | 第101页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第101-102页 |
| 2.1.4 主要仪器及耗材 | 第102-103页 |
| 2.2 试验方法 | 第103-111页 |
| 2.2.1 免疫驼乳与未免疫驼乳对鼠伤寒沙门氏菌体外抑菌作用 | 第103-104页 |
| 2.2.2 免疫与未免疫驼脱脂乳对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠体内抑菌作用 | 第104-111页 |
| 3 结果与分析 | 第111-129页 |
| 3.1 免疫与未免疫驼乳清各IgG亚型对ST菌体外抑菌作用 | 第111-115页 |
| 3.1.1 免疫与未免疫驼乳清各IgG亚型对不同浓度ST菌的生长抑制作用 | 第111-114页 |
| 3.1.2 透射电镜(TEM)检测免疫与未免疫驼乳清各IgG亚型的体外抑菌机制 | 第114-115页 |
| 3.2 IC与NIC对鼠伤寒沙门氏菌小鼠的保护作用 | 第115-129页 |
| 3.2.1 IC与NIC对ST感染小鼠状态、体重的影响 | 第115-117页 |
| 3.2.2 IC与NIC对ST感染小鼠粪便菌数的影响 | 第117页 |
| 3.2.3 IC与NIC对ST感染小鼠肠道组织结构的影响 | 第117-120页 |
| 3.2.4 IC与NIC对ST感染小鼠肝脏、脾脏组织结构的影响 | 第120-121页 |
| 3.2.5 IC和NIC对ST感染小鼠肝脏、脾脏中定植和移位的影响 | 第121-122页 |
| 3.2.6 IC与NIC对ST感染小鼠脏器指数的影响 | 第122页 |
| 3.2.7 IC与NIC对ST感染小鼠血清细胞因子分泌的影响 | 第122-123页 |
| 3.2.8 IC与NIC对ST感染小鼠肠粘膜炎症相关基因mRNA水平的影响 | 第123-125页 |
| 3.2.9 IC与NIC对ST感染小鼠肝脏细胞因子分泌的影响 | 第125-126页 |
| 3.2.10 IC与NIC对ST感染小鼠脾脏细胞因子分泌的影响 | 第126-127页 |
| 3.2.11 IC与NIC对ST感染小鼠回肠黏膜紧密连接相关基因的影响 | 第127页 |
| 3.1.12 IC与NIC对ST感染小鼠回肠黏膜化学屏障的影响 | 第127-128页 |
| 3.2.13 IC与NIC对ST感染小鼠结肠黏膜紧密连接相关基因的影响 | 第128页 |
| 3.2.14 IC与NIC对ST感染小鼠结肠黏膜化学屏障的影响 | 第128-129页 |
| 4 讨论 | 第129-134页 |
| 4.1 关于免疫与未免疫驼乳清各纯化IgGs对鼠伤寒沙门氏菌体外抑制作用及抑制机理 | 第130页 |
| 4.2 IC与NIC对小鼠抗ST感染能力的影响 | 第130-134页 |
| 4.2.1 IC与NIC对ST感染小鼠体重及一般状态的影响 | 第130-131页 |
| 4.2.2 IC与NIC对ST感染小鼠组织结构的影响 | 第131页 |
| 4.2.3 IC与NIC对ST感染小鼠血清以及肠道细胞因子的影响 | 第131-132页 |
| 4.2.4 IC与NIC对ST感染小鼠肠黏膜物理屏障的影响 | 第132页 |
| 4.2.5 IC与NIC对ST感染小鼠肠粘膜化学屏障的影响 | 第132-133页 |
| 4.2.6 IC与NIC对ST感染小鼠肝脏、脾脏的影响 | 第133-134页 |
| 第五章 结论 | 第134-135页 |
| 1 抗腹泻免疫驼乳的制备及间接ELISA检测特异性抗体活性方法的建立 | 第134页 |
| 2 抗腹泻免疫驼乳和血清各纯化IgG亚型理化稳定性的研究 | 第134页 |
| 3 免疫与未免疫驼乳清IgGs体外抑菌效果及其对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的保护作用 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-155页 |
| 作者简介 | 第155-157页 |
| 附录 | 第157-183页 |
