| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-34页 |
| 1.1 β 肾上腺素受体激动剂概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 β 肾上腺素受体激动剂结构与分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 β 肾上腺素受体激动剂药理及毒性作用 | 第16页 |
| 1.1.3 β 肾上腺素受体激动剂的危害及其在畜禽养殖中的禁用 | 第16-18页 |
| 1.2 β 肾上腺素受体激动剂检测技术研究进展 | 第18-23页 |
| 1.2.1 β 肾上腺素受体激动剂确证分析方法 | 第18-20页 |
| 1.2.2 β 肾上腺素受体激动剂快速检测技术 | 第20-23页 |
| 1.3 受体分析技术研究进展 | 第23-26页 |
| 1.3.1 受体概述 | 第23-24页 |
| 1.3.2 受体分析法及其在食品安全检测中的应用 | 第24-25页 |
| 1.3.3 受体分析法用于 β 激动剂检测的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.4 β2肾上腺素受体研究进展 | 第26-31页 |
| 1.4.1 β2肾上腺素受体结构与功能 | 第26-28页 |
| 1.4.2 β2肾上腺素受体体外表达研究 | 第28-31页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 1.6 研究内容和目标 | 第32页 |
| 1.7 技术路线 | 第32-34页 |
| 第二章 猪 β2肾上腺素受体基因的克隆及序列分析 | 第34-50页 |
| 2.1 前言 | 第34页 |
| 2.2 材料与设备 | 第34-36页 |
| 2.2.1 样品采集 | 第34页 |
| 2.2.2 菌种与载体 | 第34页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.4 引物合成和核酸测序 | 第35页 |
| 2.2.5 主要仪器设备 | 第35页 |
| 2.2.6 溶液及培养基配制 | 第35-36页 |
| 2.3 方法 | 第36-41页 |
| 2.3.1 猪肝细胞总RNA提取 | 第36-37页 |
| 2.3.2 猪肝细胞基因组DNA提取 | 第37页 |
| 2.3.3 引物设计与合成 | 第37页 |
| 2.3.4 RT-PCR扩增猪 β2AR基因 | 第37-38页 |
| 2.3.5 PCR扩增猪 β2AR基因 | 第38页 |
| 2.3.6 猪 β2AR基因的克隆与鉴定 | 第38-41页 |
| 2.4 结果与分析 | 第41-49页 |
| 2.4.1 猪肝细胞总RNA提取 | 第41-42页 |
| 2.4.2 RT-PCR及PCR扩增猪 β2AR基因 | 第42-43页 |
| 2.4.3 猪 β2AR基因的克隆与鉴定 | 第43-44页 |
| 2.4.4 猪 β2AR基因序列测定及分析 | 第44-47页 |
| 2.4.5 猪 β2AR基因序列同源性及进化树分析 | 第47-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-50页 |
| 第三章 猪 β2肾上腺素受体基因重组表达质粒的构建 | 第50-57页 |
| 3.1 前言 | 第50页 |
| 3.2 材料与设备 | 第50页 |
| 3.2.1 菌种及载体 | 第50页 |
| 3.2.2 其他材料与设备 | 第50页 |
| 3.3 方法 | 第50-53页 |
| 3.3.1 重组酵母表达质粒pPICZαA-β2AR的构建 | 第50-51页 |
| 3.3.2 重组穿梭表达质粒的构建 | 第51-53页 |
| 3.4 结果与分析 | 第53-56页 |
| 3.4.1 重组酵母表达质粒pPICZαA-β2AR的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.4.2 重组穿梭表达质粒的鉴定 | 第54-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-57页 |
| 第四章 β2肾上腺素受体基因体外表达体系比较研究 | 第57-75页 |
| 4.1 前言 | 第57页 |
| 4.2 材料与设备 | 第57-59页 |
| 4.2.1 菌种和细胞 | 第57页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第57页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 4.2.4 溶液及培养基配制 | 第58-59页 |
| 4.3 方法 | 第59-67页 |
| 4.3.1 猪 β2AR基因在毕赤酵母中的表达 | 第59-63页 |
| 4.3.2 猪 β2AR基因在大肠杆菌中的表达 | 第63-64页 |
| 4.3.3 猪 β2AR基因在哺乳动物细胞中的表达 | 第64-67页 |
| 4.3.4 表达蛋白的活性鉴定 | 第67页 |
| 4.4 结果与分析 | 第67-73页 |
| 4.4.1 猪 β2AR基因在毕赤酵母中的表达 | 第67-70页 |
| 4.4.2 猪 β2AR基因在大肠杆菌中的表达 | 第70-72页 |
| 4.4.3 猪 β2AR基因在哺乳动物细胞中的表达 | 第72页 |
| 4.4.4 表达蛋白的活性鉴定 | 第72-73页 |
| 4.5 讨论 | 第73-75页 |
| 4.5.1 表达细胞的选择 | 第73页 |
| 4.5.2 不同表达体系表达效果的比较 | 第73-74页 |
| 4.5.3 表达蛋白的活性鉴定 | 第74-75页 |
| 第五章 重组受体的纯化和鉴定 | 第75-83页 |
| 5.1 前言 | 第75页 |
| 5.2 材料与设备 | 第75-76页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第75页 |
| 5.2.2 主要设备 | 第75页 |
| 5.2.3 溶液及培养基配制 | 第75-76页 |
| 5.3 方法 | 第76-77页 |
| 5.3.1 HEK293细胞表达蛋白粗膜的制备 | 第76页 |
| 5.3.2 HEK293细胞表达蛋白的纯化 | 第76-77页 |
| 5.3.3 洗脱缓冲液中咪唑浓度的优化 | 第77页 |
| 5.3.4 纯化蛋白的鉴定 | 第77页 |
| 5.3.5 纯化蛋白浓度的测定 | 第77页 |
| 5.4 结果与分析 | 第77-81页 |
| 5.4.1 洗脱剂中咪唑浓度的优化 | 第77-78页 |
| 5.4.2 纯化蛋白的SDS-PAGE及Western blot鉴定 | 第78-80页 |
| 5.4.3 纯化蛋白的活性鉴定 | 第80页 |
| 5.4.4 纯化蛋白的含量测定 | 第80-81页 |
| 5.5 讨论 | 第81-83页 |
| 5.5.1 受体蛋白纯化方法 | 第81页 |
| 5.5.2 镍离子亲和层析纯化 | 第81-82页 |
| 5.5.3 受体蛋白的活性 | 第82-83页 |
| 第六章 直接竞争酶重组受体分析方法研究 | 第83-93页 |
| 6.1 前言 | 第83页 |
| 6.2 材料与设备 | 第83-84页 |
| 6.2.1 主要试剂 | 第83页 |
| 6.2.2 主要设备 | 第83页 |
| 6.2.3 溶液配制 | 第83-84页 |
| 6.3 方法 | 第84-86页 |
| 6.3.1 直接竞争酶受体分析法（ELRA）操作流程 | 第84页 |
| 6.3.2 ELRA工作条件的优化 | 第84-85页 |
| 6.3.3 标准曲线的建立 | 第85页 |
| 6.3.4 交叉反应率及最低检出限测定 | 第85页 |
| 6.3.5 添加回收率和变异系数测定 | 第85-86页 |
| 6.4 结果与分析 | 第86-91页 |
| 6.4.1 受体和酶标抗原工作浓度的确定 | 第86页 |
| 6.4.2 包被液的优化 | 第86-87页 |
| 6.4.3 封闭液和封闭条件的优化 | 第87页 |
| 6.4.4 标准曲线的建立 | 第87-89页 |
| 6.4.5 交叉反应率的测定 | 第89页 |
| 6.4.6 最低检出限（LOD）的测定 | 第89-90页 |
| 6.4.7 添加回收率和变异系数的测定 | 第90-91页 |
| 6.5 讨论 | 第91-93页 |
| 6.5.1 检测目标物与检测体系的确定 | 第91页 |
| 6.5.2 最佳工作条件的确定 | 第91页 |
| 6.5.3 方法学评价 | 第91-93页 |
| 第七章 全文结论 | 第93-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 附录 | 第105-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简历 | 第111-112页 |
