| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-24页 |
| 1.1 立题背景和意义 | 第10-11页 |
| 1.2 变形杆菌简介 | 第11-13页 |
| 1.2.1 变形杆菌分类及分布 | 第11页 |
| 1.2.2 变形杆菌生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.2.3 变形杆菌致病性及流行病学特性 | 第12-13页 |
| 1.3 变形杆菌检测方法 | 第13-20页 |
| 1.3.1 传统的检测方法 | 第13-16页 |
| 1.3.2 分子生物学检测方法 | 第16-20页 |
| 1.4 实时荧光环介导等温扩增（RealAmp）技术 | 第20-23页 |
| 1.4.1 RealAmp法概述 | 第20-21页 |
| 1.4.2 实时荧光监测仪(ESE Quant Tube Scanner) | 第21-22页 |
| 1.4.3 荧光染料SYBR Green Ⅰ | 第22页 |
| 1.4.4 RealAmp特点 | 第22-23页 |
| 1.5 研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-32页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第24-25页 |
| 2.1.2 试剂与样品 | 第25页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第25-27页 |
| 2.2.2 纯菌培养及DNA制备 | 第27页 |
| 2.2.3 LAMP反应 | 第27-28页 |
| 2.2.4 RealAmp反应条件的优化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 RealAmp扩增产物的分析 | 第29-30页 |
| 2.2.6 研究RealAmp法的特异性 | 第30页 |
| 2.2.7 比较RealAmp与普通LAMP检测变形杆菌纯菌的灵敏度 | 第30页 |
| 2.2.8 人工污染猪肉及其基因组DNA提取方法的比较 | 第30-31页 |
| 2.2.9 RealAmp法检测人工污染猪肉的检出限 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-52页 |
| 3.1 RealAmp反应条件的优化 | 第32-41页 |
| 3.1.1 优化荧光染料浓度（SYBR Green Ⅰ） | 第32页 |
| 3.1.2 优化反应温度 | 第32-34页 |
| 3.1.3 引物试验 | 第34-36页 |
| 3.1.4 优化DNA模板的量 | 第36-37页 |
| 3.1.5 优化dNTP | 第37-38页 |
| 3.1.6 优化Mg~(2+) | 第38-39页 |
| 3.1.7 优化缓冲液（Buffer） | 第39-40页 |
| 3.1.8 优化Bst DNA聚合酶 | 第40-41页 |
| 3.2 RealAmp扩增产物的分析 | 第41-46页 |
| 3.2.1 实时监测并直观判定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 凝胶成像系统分析 | 第42-43页 |
| 3.2.3 进行酶切分析 | 第43-45页 |
| 3.2.4 利用熔解曲线分析 | 第45-46页 |
| 3.3 RealAmp法检测变形杆菌优化后的体系 | 第46页 |
| 3.4 研究RealAmp法的特异性 | 第46-48页 |
| 3.4.1 利用RealAmp法检测不同菌种 | 第46-47页 |
| 3.4.2 利用PCR反应研究RealAmp引物的特异性 | 第47-48页 |
| 3.5 比较RealAmp与普通LAMP检测纯菌的灵敏度 | 第48-50页 |
| 3.6 变形杆菌人工污染猪肉及其基因组DNA提取方法的比较 | 第50-51页 |
| 3.7 RealAmp法检测变形杆菌人工污染猪肉检出限 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 4.1 选取靶基因 | 第52页 |
| 4.2 设计引物 | 第52-53页 |
| 4.3 RealAmp检测变形杆菌反应体系的优化 | 第53-54页 |
| 4.4 关于熔解曲线 | 第54页 |
| 4.5 RealAmp检测变形杆菌的方法学评价 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 攻读学位论文期间发表论文情况 | 第62-64页 |
| 作者简介 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
