| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| ·双歧杆菌概述 | 第12-15页 |
| ·双歧杆菌的分类和基因组学 | 第12-15页 |
| ·双歧杆菌的生理生化特性 | 第15页 |
| ·双歧杆菌的益生特性及应用 | 第15-16页 |
| ·双歧杆菌的益生作用 | 第15页 |
| ·双歧杆菌的应用及存在的问题 | 第15-16页 |
| ·双歧杆菌胁迫应答与防御机制 | 第16-25页 |
| ·热胁迫 | 第16-17页 |
| ·酸胁迫 | 第17页 |
| ·胆盐胁迫 | 第17-18页 |
| ·氧胁迫 | 第18-22页 |
| ·多胁迫交叉保护 | 第22-23页 |
| ·胁迫应答的调控 | 第23-25页 |
| ·提高双歧杆菌抗氧胁迫的方法 | 第25-26页 |
| ·传统方法 | 第25页 |
| ·基因工程改造法 | 第25-26页 |
| ·双歧杆菌的基因工程研究 | 第26-32页 |
| ·双歧杆菌转化与接合 | 第26页 |
| ·双歧杆菌质粒与载体表达 | 第26-31页 |
| ·双歧杆菌基因突变 | 第31-32页 |
| ·研究目的与内容 | 第32-34页 |
| ·研究目的及意义 | 第32页 |
| ·研究内容 | 第32页 |
| ·研究技术路线 | 第32-34页 |
| 第二章 B.longum BBMN68氧胁迫样本的RNA-seq测序及细胞生理变化检测 | 第34-46页 |
| ·材料与试剂 | 第34-35页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·试剂的配制 | 第34-35页 |
| ·仪器与设备 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·B.longum BBMN68氧胁迫样品的制备 | 第35-36页 |
| ·mRNA样品的制备 | 第36-37页 |
| ·RNA-seq测序文库的制备 | 第37-38页 |
| ·RNA-seq高通量测序 | 第38页 |
| ·转录组元数据处理 | 第38-39页 |
| ·氧胁迫条件下B.longum BBMN68细胞形态和表面性质变化分析 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·B.longum BBMN68氧胁迫样品的制备 | 第39-40页 |
| ·转录组测序数据输出与分析 | 第40-42页 |
| ·氧胁迫条件下B.longum BBMN68细胞形态变化 | 第42-43页 |
| ·氧胁迫条件下B.longum BBMN68细胞疏水性变化 | 第43-44页 |
| ·氧胁迫条件下B.longum BBMN68细胞聚集性变化 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 转录组数据的sqRT-PCR验证及差异表达基因的生物信息学分析 | 第46-74页 |
| ·材料与试剂 | 第46-47页 |
| ·菌株 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·试剂的配制 | 第46页 |
| ·仪器与设备 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·B.longum BBMN68氧气胁迫样品的制备 | 第47页 |
| ·双歧杆菌总RNA的提取与定量 | 第47-48页 |
| ·反转录制备cDNA | 第48-49页 |
| ·半定量引物的设计与合成 | 第49-50页 |
| ·半定量RT-PCR验证转录组数据 | 第50-51页 |
| ·氧胁迫差异表达基因的直系同源聚类分析 | 第51页 |
| ·氧胁迫差异表达基因参与的代谢途径分析 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-62页 |
| ·总RNA的提取与cDNA制备 | 第51-52页 |
| ·引物特异性与扩增质最检测 | 第52页 |
| ·半定量RT-PCR检测基因转录表达差异 | 第52-54页 |
| ·氧胁迫差异表达基因的直系同源聚类分析 | 第54-62页 |
| ·氧胁迫差异表达基因参与的代谢途径分析 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-74页 |
| ·ROS解毒与氧化还原平衡 | 第62-63页 |
| ·一般胁迫反应 | 第63-64页 |
| ·碳水化合物转运和代谢 | 第64-67页 |
| ·核苷酸转运与代谢 | 第67-68页 |
| ·氨基酸和蛋白质合成 | 第68-70页 |
| ·氧胁迫诱导BBMN68叶酸合成 | 第70-71页 |
| ·信号转导 | 第71-72页 |
| ·细胞表面性质变化 | 第72-73页 |
| ·氧胁迫引起BBMN68的其他变化 | 第73-74页 |
| 第四章 氧胁迫差异表达基因的异源超量表达及功能验证 | 第74-96页 |
| ·材料与试剂 | 第74-77页 |
| ·菌株与质粒 | 第74-75页 |
| ·试剂 | 第75页 |
| ·试剂的配制 | 第75-77页 |
| ·仪器与设备 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-84页 |
| ·双歧杆菌总DNA提取 | 第77-78页 |
| ·氧胁迫差异表达基因的PCR扩增 | 第78-79页 |
| ·DNA的回收与纯化 | 第79-80页 |
| ·氧胁迫差异表达基因的表达载体构建 | 第80页 |
| ·重组载体电转化B.longum NCC2705 | 第80-81页 |
| ·重组基因表达的mRNA检测 | 第81页 |
| ·重组基因表达的SDS-PAGE检测 | 第81-82页 |
| ·重组菌株的氧化胁迫耐受能力评价 | 第82页 |
| ·重组菌株氧化胁迫下细胞过氧化物水平测定 | 第82-83页 |
| ·超量表达AhpC对重组菌株自身抗胁迫基因表达的影响 | 第83-84页 |
| ·结果与分析 | 第84-92页 |
| ·B.longum BBMN68的总DNA提取 | 第84页 |
| ·氧胁迫差异表达些因的PCR扩增 | 第84-85页 |
| ·氧胁迫差异表达基因的超量表达载体构建及转化 | 第85-87页 |
| ·氧胁迫差异表达基因的超量表达 | 第87页 |
| ·重组菌株的抗氧化胁迫能力评价 | 第87-89页 |
| ·AhpC2重组菌株氧化胁迫下细胞过氧化物水平测定 | 第89-92页 |
| ·AhpC2超量表达对重组菌株自身抗氧化胁迫基因表达的影响 | 第92页 |
| ·讨论 | 第92-96页 |
| 第五章 异源重组抗氧化蛋白对双歧杆菌抗氧化能力和自身抗氧化系统的影响 | 第96-116页 |
| ·材料与试剂 | 第96-98页 |
| ·菌株与质粒 | 第96-97页 |
| ·试剂 | 第97页 |
| ·试剂的配制 | 第97页 |
| ·仪器与设备 | 第97-98页 |
| ·实验方法 | 第98-103页 |
| ·乳酸菌总DNA提取 | 第98页 |
| ·目标基因Kat和Sod的PCR扩增 | 第98-99页 |
| ·DNA的回收与纯化 | 第99页 |
| ·LpKatL和StSodA基因的表达载体构建 | 第99页 |
| ·重组载体电转化B.longum NCC2705 | 第99页 |
| ·重组菌株基因表达的检测 | 第99页 |
| ·重组菌株酶活性的检测 | 第99-101页 |
| ·重组菌株氧化胁迫下细胞过氧化物水平测定 | 第101页 |
| ·重组菌株氧化胁迫下DNA/RNA损伤程度检测 | 第101页 |
| ·重组菌株的氧化胁迫耐受能力评价 | 第101-102页 |
| ·重组SOD和KAT对菌株自身抗胁迫丛因表达的影响 | 第102-103页 |
| ·结果与分析 | 第103-113页 |
| ·乳酸菌总DNA提取 | 第104页 |
| ·StSodA和LpKatL基因的PCR扩增 | 第104-105页 |
| ·StSodA和LpKatL基因的表达载体构建及转化 | 第105-106页 |
| ·StSodA和LpKatL基因的异源表达 | 第106-107页 |
| ·重组菌株酶活性的检测 | 第107-108页 |
| ·重组菌株氧化胁迫下细胞过氧化物水平测定 | 第108-109页 |
| ·重组菌株氧化胁迫下DNA/RNA损伤程度检测 | 第109-110页 |
| ·重组菌株的抗氧化胁迫能力评价 | 第110-112页 |
| ·重组SOD和KAT对菌株自身抗胁迫基因表达的影响 | 第112-113页 |
| ·讨论 | 第113-116页 |
| 第六章 全文总结与展望 | 第116-120页 |
| ·全文总结 | 第116页 |
| ·创新点 | 第116-117页 |
| ·展望 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
| 附录 | 第146-174页 |
| 个人简介 | 第174-175页 |
