| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 引言 | 第8-21页 |
| ·胶原蛋白 | 第8-14页 |
| ·胶原蛋白的分布 | 第8页 |
| ·胶原蛋白的结构 | 第8-10页 |
| ·胶原蛋白的种类 | 第10-11页 |
| ·胶原蛋白的性质 | 第11页 |
| ·胶原蛋白的功能及应用 | 第11页 |
| ·胶原蛋白的生产 | 第11-13页 |
| ·胶原蛋白与疾病 | 第13-14页 |
| ·明胶 | 第14页 |
| ·胶原、胶原蛋白与明胶 | 第14-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第15-16页 |
| ·重组鼠胶原蛋白 | 第16-17页 |
| ·重组(类)人胶原蛋白 | 第17-18页 |
| ·重组人胶原蛋白的应用与发展 | 第18-19页 |
| ·本论文研究内容与定位 | 第19-21页 |
| 2 材料与试剂 | 第21-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·培养基和常用溶液配制 | 第23-24页 |
| 3 类人胶原蛋白基因的合成、构建及表达 | 第24-70页 |
| ·表达载体构建策略 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-42页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第25-33页 |
| ·类人胶原蛋白基因单体的设计合成 | 第25-26页 |
| ·类人胶原蛋白基因单体的获得和接头复性 | 第26页 |
| ·类人胶原蛋白基因三串联体克隆载体的构建 | 第26-29页 |
| ·类人胶原蛋白基因六串联体克隆载体的构建 | 第29-30页 |
| ·类人胶原蛋白基因六串联体表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第32-33页 |
| ·表达载体电转化酵母宿主菌GS115 | 第33-34页 |
| ·待转化质粒的线性化 | 第33-34页 |
| ·酵母GS115感受态制备 | 第34页 |
| ·电击转化GS115 | 第34页 |
| ·高表达重组酵母的筛选 | 第34-37页 |
| ·甲醇利用表型的筛选 | 第34-35页 |
| ·菌落PCR鉴定重组酵母 | 第35-36页 |
| ·高拷贝重组酵母的筛选 | 第36-37页 |
| ·高表达重组酵母的筛选 | 第37页 |
| ·类人胶原蛋白的酵母诱导表达 | 第37-41页 |
| ·酵母工程菌的发酵和诱导表达 | 第37-38页 |
| ·表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE | 第38-40页 |
| ·诱导表达条件优化 | 第40-41页 |
| ·类人胶原蛋白的纯化初探 | 第41-42页 |
| ·硫酸铵分级盐析 | 第41-42页 |
| ·丙酮分级沉淀 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-69页 |
| ·类人胶原蛋白基因单体gel | 第42-43页 |
| ·类人胶原蛋白串联基因载体构建与鉴定 | 第43-54页 |
| ·G1片段的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·pUC57-AlG3和pUC57-A1G6的构建与鉴定 | 第44-48页 |
| ·pPIC9KG6的构建与鉴定 | 第48-54页 |
| ·毕赤酵母电转化及高表达重组酵母的筛选与鉴定 | 第54-62页 |
| ·表达载体pPIC9KG6线性化 | 第54-55页 |
| ·毕赤酵母GS115电转化及菌落PCR筛选结果 | 第55-57页 |
| ·高拷贝重组酵母筛选结果 | 第57页 |
| ·高表达重组酵母筛选结果 | 第57-62页 |
| ·类人胶原蛋白的表达及条件优化 | 第62-65页 |
| ·最佳诱导时间优化结果 | 第62-64页 |
| ·正交试验结果分析 | 第64-65页 |
| ·类人胶原蛋白的纯化 | 第65-67页 |
| ·硫酸铵分级盐析结果 | 第65-66页 |
| ·丙酮分级沉淀结果 | 第66-67页 |
| ·关于gel基因设计的讨论 | 第67-69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 附录A 基因序列 | 第71-72页 |
| 附录B 蛋白质序列 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |