| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-29页 |
| 1.1 立题背景及目的 | 第10-12页 |
| 1.2 单核细胞增生李斯特菌的简介 | 第12-16页 |
| 1.2.1 单核细胞增生李斯特菌的发现与分型 | 第12页 |
| 1.2.2 单增李斯特氏菌的分布 | 第12-13页 |
| 1.2.3 单核细胞增生李斯特菌的生物学特征 | 第13-16页 |
| 1.2.4 单核细胞增生李斯特氏菌的流行病学特征 | 第16页 |
| 1.3 单增李斯特氏菌检测方法研究现状 | 第16-19页 |
| 1.3.1 传统的生化鉴定法 | 第17页 |
| 1.3.2 免疫学检测方法 | 第17-18页 |
| 1.3.3 分子生物学检测方法 | 第18-19页 |
| 1.4 环介导等温扩增(LAMP)技术及应用 | 第19-25页 |
| 1.4.1 LAMP 技术概述 | 第19页 |
| 1.4.2 LAMP 方法的引物设计 | 第19-21页 |
| 1.4.3 LAMP 法的理论基础 | 第21-25页 |
| 1.5 实时荧光环节导等温扩增技术（RTF-LAMP） | 第25-27页 |
| 1.5.1 实时荧光环介导等温扩增技术原理 | 第25-26页 |
| 1.5.2 实时荧光监测仪简介 | 第26页 |
| 1.5.3 RTF-LAMP 的应用 | 第26-27页 |
| 1.5.4 实时荧光环介导等温扩增技术反应的防污染措施 | 第27页 |
| 1.6 本课题主要研究内容 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 试验用菌株 | 第29页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.3 试验用培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.4 样品与生化试剂 | 第31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-32页 |
| 2.2.1 菌种的培养 | 第31页 |
| 2.2.2 细菌 DNA 模板的提取 | 第31-32页 |
| 2.3 RTF-LAMP 主要操作程序 | 第32-33页 |
| 2.3.1 设计 RTF-LAMP 的引物 | 第32-33页 |
| 2.3.2 RTF-LAMP 主要操作 | 第33页 |
| 2.4 RTF-LAMP 反应条件优化 | 第33-35页 |
| 2.4.1 RTF-LAMP 反应中反应温度的优化 | 第33-34页 |
| 2.4.2 RTF-LAMP 反应中 10×BstDNA 聚合酶缓冲液的优化 | 第34页 |
| 2.4.3 RTF-LAMP 反应中 Mg2+优化 | 第34页 |
| 2.4.4 RTF-LAMP 反应中 dNTPs 浓度的优化 | 第34页 |
| 2.4.5 RTF-LAMP 反应中 BstDNA 聚合酶的优化 | 第34页 |
| 2.4.6 RTF-LAMP 反应中甜菜碱对 RTF- LAMP 反应的影响 | 第34页 |
| 2.4.7 RTF-LAMP 反应中 SYBR Green I 荧光染料的优化 | 第34页 |
| 2.4.8 引物对 RTF-LAMP 反应的影响 | 第34-35页 |
| 2.5 引物特异性的检测 | 第35页 |
| 2.5.1 RTF-LAMP 引物特异性的检测 | 第35页 |
| 2.5.2 PCR 引物特异性的检测 | 第35页 |
| 2.6 RTF-LAMP 反应与普通 PCR、LAMP 检测单增李斯特氏菌的灵敏度 | 第35-36页 |
| 2.6.1 RTF-LAMP 检测单增李斯特氏菌的灵敏度 | 第35-36页 |
| 2.6.2 比较 RTF-LAMP 与 LAMP、PCR 检测单增李斯特氏菌的灵敏度 | 第36页 |
| 2.7 判断 RTF-LAMP 扩增结果的方法 | 第36页 |
| 2.7.1 LAMP 反应实时荧光监测仪图谱分析 | 第36页 |
| 2.7.2 RTF-LAMP 结果酶切分析 | 第36页 |
| 2.8 人工污染熏肉中单增李斯特菌基因组 DNA 检测 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-53页 |
| 3.1 RTF-LAMP 反应条件的优化 | 第38-45页 |
| 3.1.1 RTF-LAMP 反应中最适反应温度的选择 | 第38-39页 |
| 3.1.2 体系中 10×BstDNA 聚合酶缓冲液优化 | 第39-40页 |
| 3.1.3 RTF-LAMP 反应中最适 Mg2+浓度的优化 | 第40-41页 |
| 3.1.4 RTF-LAMP 反应中 dNTPs 优化 | 第41-42页 |
| 3.1.5 RTF-LAMP 反应中 BstDNA 聚合酶优化 | 第42页 |
| 3.1.6 甜菜碱对实时 RTF-LAMP 反应的影响 | 第42-43页 |
| 3.1.7 RTF-LAMP 反应中 SYBR Green I 荧光染料的优化 | 第43-44页 |
| 3.1.8 RTF-LAMP 反应中引物的优化 | 第44-45页 |
| 3.1.9 RTF-LAMP 反应最佳体系的确定 | 第45页 |
| 3.2 RTF-LAMP 反应中引物的特异性研究 | 第45-49页 |
| 3.2.1 RTF-LAMP 引物特异性的检测 | 第45-47页 |
| 3.2.2 PCR 引物特异性的研究 | 第47-48页 |
| 3.2.3 RTF-LAMP 扩增产物的酶切分析 | 第48-49页 |
| 3.3 单增李斯特氏菌的灵敏度检测 | 第49-51页 |
| 3.3.1 平板菌落计数法测定单增李斯特氏菌的浓度 | 第49页 |
| 3.3.2 RTF-LAMP 法检测单增李斯特氏菌的灵敏度 | 第49页 |
| 3.3.3 PCR 检测单增李斯特氏菌的灵敏度 | 第49-50页 |
| 3.3.4 LAMP 检测单增李斯特氏菌的灵敏度 | 第50-51页 |
| 3.4 人工污染熏肉测定其检出限 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 实时荧光环介导等温扩增(RTF-LAMP)方法检测单增李斯特氏菌方法学评价 | 第53页 |
| 4.2 靶基因的选择 | 第53页 |
| 4.3 RTF-LAMP 引物的选择 | 第53-54页 |
| 4.4 增菌计数时间的选择 | 第54页 |
| 4.5 RTF-LAMP 反应条件的优化 | 第54-55页 |
| 4.6 RTF- LAMP 的污染防控 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 作者简介 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
