| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第23-41页 |
| 1.1 发酵饮品中氨基甲酸乙酯的存在与分布 | 第23-29页 |
| 1.1.1 发酵饮品中氨基甲酸乙酯的发现 | 第23-26页 |
| 1.1.2 发酵饮品中氨基甲酸乙酯的毒害机理 | 第26页 |
| 1.1.3 发酵饮品中氨基甲酸乙酯的形成途径 | 第26-28页 |
| 1.1.4 发酵饮品中氨基甲酸乙酯的检测方法 | 第28-29页 |
| 1.2 发酵酒精饮品中氨基甲酸乙酯的抑制途径 | 第29-32页 |
| 1.2.1 外源添加脲酶降低氨基甲酸乙酯的前体物浓度 | 第30-31页 |
| 1.2.2 基因工程改造发酵菌株 | 第31-32页 |
| 1.3 发酵黄酒中氨基甲酸乙酯代谢前体物的代谢调控机制 | 第32-36页 |
| 1.3.1 精氨酸在酿酒酵母中的代谢调控机制 | 第32-35页 |
| 1.3.2 尿素在酿酒酵母中的代谢调控机制 | 第35-36页 |
| 1.4 氮代谢调控因子对黄酒发酵中氨基甲酸乙酯的影响 | 第36-38页 |
| 1.4.1 氮代谢转录调控因子的研究现状 | 第36-37页 |
| 1.4.2 氮代谢转录调控因子对氨基甲酸乙酯形成的影响 | 第37-38页 |
| 1.5 本课题研究意义和主要内容 | 第38-41页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第38页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第38-40页 |
| 1.5.3 技术路线图 | 第40-41页 |
| 第二章 酿酒酵母替代酒药发酵对黄酒品质的影响 | 第41-55页 |
| 2.1 前言 | 第41-42页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第42-43页 |
| 2.2.1 菌株及试剂 | 第42页 |
| 2.2.2 培养基 | 第42页 |
| 2.2.3 仪器与设备 | 第42-43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 2.3.1 菌株培养 | 第43页 |
| 2.3.2 黄酒酿造及煎酒 | 第43-44页 |
| 2.3.3 精氨酸浓度测定 | 第44页 |
| 2.3.4 尿素浓度测定 | 第44-45页 |
| 2.3.5 氨基甲酸乙酯浓度测定 | 第45页 |
| 2.3.6 乙醇含量测定 | 第45-46页 |
| 2.3.7 风味物质检测 | 第46页 |
| 2.3.8 游离氨基酸含量测定 | 第46页 |
| 2.4 结果与分析 | 第46-53页 |
| 2.4.1 发酵过程中精氨酸变化水平 | 第46-48页 |
| 2.4.2 发酵过程中尿素浓度变化水平 | 第48-49页 |
| 2.4.3 发酵过程中氨基甲酸乙酯变化水平 | 第49-50页 |
| 2.4.4 发酵产品中酒精度测定 | 第50-51页 |
| 2.4.5 发酵产品中风味物质组成及含量 | 第51-52页 |
| 2.4.6 发酵黄酒中氨基酸组成及含量差异分析 | 第52-53页 |
| 2.5 结论 | 第53-55页 |
| 第三章 转录组分析筛选潜在的氨基甲酸乙酯产生抑制因子 | 第55-74页 |
| 3.1 前言 | 第55-56页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第56页 |
| 3.2.1 菌株 | 第56页 |
| 3.2.2 培养基与主要试剂 | 第56页 |
| 3.2.3 仪器与设备 | 第56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-59页 |
| 3.3.1 精氨酸酶活测定 | 第56-57页 |
| 3.3.2 细胞培养与RNA提取 | 第57页 |
| 3.3.3 构建文库并上机测序 | 第57-58页 |
| 3.3.4 转录组生物信息分析 | 第58-59页 |
| 3.4 结果与分析 | 第59-73页 |
| 3.4.1 精氨酸酶活测定 | 第59-60页 |
| 3.4.2 RNA提取及质量检测 | 第60-61页 |
| 3.4.3 基因转录水平的总体变化 | 第61-65页 |
| 3.4.4 表达差异基因的Go富集分析 | 第65-67页 |
| 3.4.5 表达差异基因的KEGG富集分析 | 第67-69页 |
| 3.4.6 参与酿酒酵母氮代谢的差异表达基因 | 第69-71页 |
| 3.4.7 氮代谢抑制调控因子相关基因的转录水平变化 | 第71-72页 |
| 3.4.8 氮源信号转导途径中相关基因的转录水平变化 | 第72-73页 |
| 3.5 结论 | 第73-74页 |
| 第四章 转录因子Dal80p的表达纯化及其对氮代谢相关酶的抑制影响 | 第74-91页 |
| 4.1 前言 | 第74-75页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第75-76页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第75页 |
| 4.2.2 培养基与主要试剂 | 第75-76页 |
| 4.2.3 仪器与设备 | 第76页 |
| 4.3 实验方法 | 第76-82页 |
| 4.3.1 DAL80基因的扩增及回收 | 第76-78页 |
| 4.3.2 构建和筛选Dal80p表达菌株 | 第78-79页 |
| 4.3.3 Dal80p蛋白纯化 | 第79-80页 |
| 4.3.4 Dal80p三级结构预测 | 第80页 |
| 4.3.5 EMSA(electrophoretic mobility shift assay)实验 | 第80-82页 |
| 4.4 结果与分析 | 第82-90页 |
| 4.4.1 PCR获得DAL80基因 | 第82页 |
| 4.4.2 测序结果比对 | 第82-84页 |
| 4.4.3 Dal80p融合蛋白的纯化 | 第84-85页 |
| 4.4.4 Dal80p三维结构预测 | 第85-87页 |
| 4.4.5 EMSA实验检测Dal80p与DUR1,2和CAR1的结合能力 | 第87-90页 |
| 4.5 结论 | 第90-91页 |
| 第五章 DAL80敲除对酿酒酵母氮代谢途径的调控机制及对黄酒发酵品质影响 | 第91-111页 |
| 5.1 前言 | 第91-92页 |
| 5.2 实验材料与设备 | 第92-93页 |
| 5.2.1 菌株 | 第92页 |
| 5.2.2 培养基与主要试剂 | 第92页 |
| 5.2.3 仪器与设备 | 第92-93页 |
| 5.3 实验方法 | 第93-97页 |
| 5.3.1 酵母细胞生长曲线测定 | 第93页 |
| 5.3.2 精氨酸酶活测定 | 第93页 |
| 5.3.3 脲酶活性测定 | 第93页 |
| 5.3.4 发酵液中精氨酸浓度测定 | 第93-94页 |
| 5.3.5 发酵液中尿素浓度测定 | 第94页 |
| 5.3.6 RT-PCR检测氮代谢相关基因的转录水平 | 第94-96页 |
| 5.3.7 发酵液中氨基甲酸乙酯的测定 | 第96页 |
| 5.3.8 发酵产品中酒精度测定 | 第96页 |
| 5.3.9 发酵产品中风味物质的检测 | 第96页 |
| 5.3.10 发酵产品中氨基酸的检测 | 第96-97页 |
| 5.4 结果与分析 | 第97-109页 |
| 5.4.1 DAL80敲除对酵母细胞生长性能的影响 | 第97页 |
| 5.4.2 DAL80敲除菌株中精氨酸及尿素代谢水平变化 | 第97-100页 |
| 5.4.3 DAL80敲除菌株中精氨酸及尿素代谢相关基因的表达水平 | 第100-103页 |
| 5.4.4 DAL80敲除对黄酒酿造过程精氨酸浓度的影响 | 第103-104页 |
| 5.4.5 DAL80敲除对黄酒酿造过程尿素浓度的影响 | 第104-105页 |
| 5.4.6 DAL80敲除对黄酒酿造过程氨基甲酸乙酯浓度的影响 | 第105-106页 |
| 5.4.7 DAL80敲除对发酵产品中酒精度影响 | 第106-107页 |
| 5.4.8 DAL80敲除对发酵产品中风味物质组成及含量影响 | 第107-108页 |
| 5.4.9 DAL80敲除对发酵产品中氨基酸组成及含量影响 | 第108-109页 |
| 5.5 结论 | 第109-111页 |
| 第六章 结论与展望 | 第111-114页 |
| 6.1 主要研究结论 | 第111-112页 |
| 6.2 主要创新点 | 第112-113页 |
| 6.3 研究展望 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-126页 |
| 附录 | 第126-140页 |
| 主要研究成果及个人简介 | 第140页 |
