| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 乙偶姻和 2,3-丁二醇简介 | 第8-9页 |
| 1.1.1 乙偶姻和 2,3-丁二醇的理化性质 | 第8页 |
| 1.1.2 乙偶姻和 2,3-丁二醇的应用 | 第8-9页 |
| 1.2 乙偶姻和 2,3-丁二醇的合成方法 | 第9-11页 |
| 1.2.1 乙偶姻和 2,3-丁二醇的化学合成法 | 第9-10页 |
| 1.2.2 乙偶姻和 2,3-丁二醇的生物合成法 | 第10-11页 |
| 1.3 微生物发酵法高产乙偶姻和 2,3-丁二醇的策略 | 第11-14页 |
| 1.3.1 菌株选育 | 第11-12页 |
| 1.3.2 培养基与发酵工艺优化 | 第12页 |
| 1.3.3 代谢工程改造育种 | 第12-14页 |
| 1.4 C. crenatum SYPA5-5 简介 | 第14-15页 |
| 1.5 2,3-丁二醇脱氢酶（乙偶姻还原酶） | 第15页 |
| 1.6 本论文的研究思路与研究内容 | 第15-17页 |
| 1.6.1 本论文的研究思路 | 第15-16页 |
| 1.6.2 本论文的研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株、质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.2 引物 | 第18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.5 培养基与培养条件 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-26页 |
| 2.2.1 染色体基因组DNA的提取和质粒DNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.2 目的基因的PCR扩增反应与产物回收 | 第20页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第20-21页 |
| 2.2.4 缺失型基因 ΔbutA与 Δldh的获得 | 第21页 |
| 2.2.5 重组表达质粒的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.6 C. crenatum感受态细胞的制备与电转化 | 第22-23页 |
| 2.2.7 butA与ldh缺失型重组菌C. crenatumΔbutAΔldh的构建 | 第23页 |
| 2.2.8 重组C. crenatum的构建 | 第23页 |
| 2.2.9 重组C. crenatum的蛋白表达与相关酶活测定 | 第23-24页 |
| 2.2.10 C. crenatum发酵与全细胞转化条件 | 第24页 |
| 2.2.11 发酵与转化参数测定与分析 | 第24-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-47页 |
| 3.1 产乙偶姻和 2,3-丁二醇的重组C. crenatum的构建与发酵分析 | 第26-32页 |
| 3.1.1 乙偶姻和 2,3-丁二醇代谢途径关键酶基因的克隆与分析 | 第26页 |
| 3.1.2 重组质粒pXMJ19-alsS、pXMJ19-alsD与pXMJ19-bdhA的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| 3.1.3 重组质粒pXMJ19-alsSD与pXMJ19-alsSD-bdhA的构建与验证 | 第27-29页 |
| 3.1.4 重组菌C. crenatum/pXMJ19-alsS、C. crenatum/pXMJ19-alsD、C. crenatum/pXMJ19-bdhA的构建 | 第29-30页 |
| 3.1.5 重组菌C. crenatum/pXMJ19-alsSD、C. crenatum/pXMJ19-alsSD-bdhA的构建 | 第30页 |
| 3.1.6 重组C. crenatum中ALS、ALDC与AR/BDH的表达与酶活分析 | 第30-31页 |
| 3.1.7 重组C. crenatum的摇瓶发酵产乙偶姻和 2,3-丁二醇 | 第31-32页 |
| 3.1.8 重组C. crenatum的全细胞转化产乙偶姻和 2,3-丁二醇 | 第32页 |
| 3.2 C. crenatum中 2,3-丁二醇脱氢酶的克隆表达与酶学性质初步研究 | 第32-35页 |
| 3.2.1 重组质粒pET28a(+)-butA的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2 2,3-丁二醇脱氢酶的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.3 2,3-丁二醇脱氢酶的最适反应温度与最适反应pH | 第34页 |
| 3.2.4 金属离子和EDTA对 2,3-丁二醇脱氢酶的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.5 2,3-丁二醇脱氢酶的相关酶动力学参数 | 第35页 |
| 3.3 butA与ldh基因缺失型菌株C. crenatumΔbutAΔldh的构建与鉴定 | 第35-41页 |
| 3.3.1 butA基因及其缺失型片段 ΔbutA的克隆 | 第35-36页 |
| 3.3.2 重组质粒pK18-ΔbutA的构建与鉴定 | 第36页 |
| 3.3.3 butA缺失型菌株的鉴定与酶活测定 | 第36-37页 |
| 3.3.4 ldh基因及其缺失型片段 Δldh的克隆 | 第37-38页 |
| 3.3.5 重组质粒pK18-Δldh的构建与鉴定 | 第38页 |
| 3.3.6 ldh缺失型菌株的鉴定与酶活测定 | 第38-39页 |
| 3.3.7 butA与ldh基因缺失型菌株的构建 | 第39-41页 |
| 3.4 重组菌C. crenatumΔbutAΔldh/pXMJ19-alsSD与C. crenatumΔldh/pXMJ19-alsSD-bdhA的全细胞转化 | 第41-47页 |
| 3.4.1 重组菌C. crenatumΔbutAΔldh/pXMJ19-alsSD与C. crenatumΔldh/pXMJ19-alsSD-bdhA的构建 | 第42页 |
| 3.4.2 重组菌C. crenatumΔbutAΔldh以葡萄糖为底物的全细胞转化 | 第42-43页 |
| 3.4.3 重组菌C. crenatumΔbutAΔldh/pXMJ19-alsSD的全细胞转化产乙偶姻 | 第43-45页 |
| 3.4.4 重组菌C. crenatumΔldh/pXMJ19-alsSD-bdhA的全细胞转化产 2,3-丁二醇 | 第45-47页 |
| 主要结论与展望 | 第47-49页 |
| 主要结论 | 第47-48页 |
| 展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
