| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 萜类 | 第12页 |
| 1.2 萜类的生产 | 第12页 |
| 1.3 番茄红素的合成 | 第12-16页 |
| 1.3.1 番茄红素的结构与性质 | 第13页 |
| 1.3.2 番茄红素的生理功能 | 第13页 |
| 1.3.3 番茄红素的制备方法 | 第13-14页 |
| 1.3.4 番茄红素的生物合成途径 | 第14-15页 |
| 1.3.5 工程微生物合成番茄红素概况 | 第15页 |
| 1.3.6 番茄红素的市场前景 | 第15-16页 |
| 1.4 工程微生物发酵合成番茄红素的优化策略 | 第16-17页 |
| 1.4.1 底盘宿主的适配性优化 | 第16页 |
| 1.4.2 途径的优化 | 第16-17页 |
| 1.4.3 发酵条件和工艺的优化 | 第17页 |
| 1.5 本课题研究的意义与内容 | 第17-19页 |
| 第2章 材料和方法 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 药品及试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 菌株的培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2 大肠杆菌的转化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 酿酒酵母感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.4 酿酒酵母的转化 | 第25页 |
| 2.2.5 大肠杆菌中质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.6 酵母基因组的提取 | 第26页 |
| 2.2.7 目的基因扩增及基因表达盒的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.8 PCR产物纯化 | 第27页 |
| 2.2.9 质粒的线性化 | 第27-28页 |
| 2.2.10 阳性克隆的筛选 | 第28页 |
| 2.2.11 酵母总RNA的提取及反转录 | 第28页 |
| 2.2.12 基因表达水平检测 | 第28-29页 |
| 2.2.13 菌体生物量的测定 | 第29页 |
| 2.3 番茄红素及其代谢产物的提取与测定 | 第29-32页 |
| 2.3.1 番茄红素的提取与测定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 中间代谢产物的提取与测定 | 第30-32页 |
| 第3章 番茄红素合成途径在酿酒酵母中的构建 | 第32-40页 |
| 引言 | 第32页 |
| 3.1 番茄红素生物合成途径的设计 | 第32-33页 |
| 3.2 外源基因的密码子优化 | 第33-34页 |
| 3.3 目标片段的扩增 | 第34-36页 |
| 3.4 番茄红素合成途径在酿酒酵母中的组装 | 第36-37页 |
| 3.5 番茄红素合成途径在酿酒酵母中的表达验证 | 第37-39页 |
| 3.6 小结 | 第39-40页 |
| 第4章 酿酒酵母合成番茄红素的适配性优化研究 | 第40-52页 |
| 引言 | 第40页 |
| 4.1 酿酒酵母合成番茄红素的适配性优化 | 第40-43页 |
| 4.1.1 酿酒酵母底盘宿主的选择 | 第40-42页 |
| 4.1.2 基因拷贝数的优化 | 第42页 |
| 4.1.3 启动子种类的优化 | 第42-43页 |
| 4.2 提高GGPP供应对番茄红素合成的影响 | 第43-47页 |
| 4.3 强化MVA途径对番茄红素合成的影响 | 第47-50页 |
| 4.4 小结 | 第50-52页 |
| 第5章 酿酒酵母合成番茄红素的发酵工艺优化研究 | 第52-60页 |
| 引言 | 第52页 |
| 5.1 基础培养条件的优化 | 第52-58页 |
| 5.1.1 碳源的选择 | 第52-53页 |
| 5.1.2 氮源的选择 | 第53-54页 |
| 5.1.3 MgSO_4添加量优化 | 第54页 |
| 5.1.4 K_2HPO_4·3H_2O添加量优化 | 第54-55页 |
| 5.1.5 接种量对发酵的影响 | 第55-56页 |
| 5.1.6 装液量对发酵的影响 | 第56页 |
| 5.1.7 转数对发酵的影响 | 第56-57页 |
| 5.1.8 pH对发酵的影响 | 第57页 |
| 5.1.9 温度对发酵的影响 | 第57-58页 |
| 5.2 补料发酵优化 | 第58-59页 |
| 5.3 小结 | 第59-60页 |
| 第6章 结论与展望 | 第60-61页 |
| 6.1 结论 | 第60页 |
| 6.2 对今后工作的建议与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69-70页 |
| 附件 | 第70页 |