| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第10-14页 |
| 第一部分 FGF9基因在多发性骨性粘连综合症（SYNS3）中的发病机制及其对关节发育的影响 | 第14-53页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 1 实验材料 | 第16-22页 |
| 1.1 实验动物 | 第16页 |
| 1.2 生化与分子细胞生物学试剂 | 第16-17页 |
| 1.3 主要溶液配方 | 第17-20页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第20页 |
| 1.5 PCR引物设计与合成 | 第20-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-34页 |
| 2.1 Fgf9基因Ser99Asp（S99N）突变小鼠构建 | 第22页 |
| 2.2 小鼠基因型鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3 细胞培养及瞬时转染 | 第23-24页 |
| 2.4 稳转细胞筛选 | 第24页 |
| 2.5 原位TUNEL细胞凋亡检测 | 第24-25页 |
| 2.6 Annexin V检测细胞凋亡 | 第25页 |
| 2.7 放射成像 | 第25页 |
| 2.8 组织病理检测 | 第25页 |
| 2.9 小鼠全骨架染色 | 第25-26页 |
| 2.10 骨骼特殊染色——阿尔辛蓝染色与Vonkossa染色 | 第26页 |
| 2.11 组织免疫组化和免疫荧光 | 第26-27页 |
| 2.12 小鼠全胚原位杂交 | 第27-29页 |
| 2.13 小鼠肢芽微团细胞原代培养（LBMMC）及分化 | 第29-30页 |
| 2.14 软骨分化阿辛蓝染色 | 第30页 |
| 2.15 RNA抽提及荧光实时定量PCR (Real-time PCR) | 第30页 |
| 2.16 免疫印迹（Western blot） | 第30-31页 |
| 2.17 FGF9与FGFR结合实验 | 第31页 |
| 2.18 FGF9蛋白与肝素亲和力实验 | 第31-32页 |
| 2.19 GST-FGF9融合蛋白原核表达 | 第32页 |
| 2.20 萤光素酶（Luciferase）报告基因启动子活性分析 | 第32-33页 |
| 2.21 计算机 3D蛋白模拟分析 | 第33页 |
| 2.22 图像拍摄及处理 | 第33-34页 |
| 2.23 统计学方法 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-49页 |
| 3.1 小鼠Fgf9基因Ser99Asn(S99N)突变成功模拟人类多发性骨性粘连综合症表型 | 第34-40页 |
| 3.2 Fgf9~(mt/mt)小鼠关节障碍由发育早期关节位置软骨异常增生造成 | 第40-42页 |
| 3.3 Fgf9通过下调Sox6和Sox9抑制间质细胞向软骨细胞分化 | 第42-43页 |
| 3.4 Fgf9维持肘膝关节Gdf5基因表达 | 第43-45页 |
| 3.5 S99N突变减弱了Fgf9在关节区域的信号转导 | 第45-47页 |
| 3.6 S99N突变通过改变FGF9蛋白构象扰乱FGF9/FGFR/Heparin间的相互作用 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| 第二部分 Fgf9基因在骨代谢中的作用及其机制 | 第53-77页 |
| 前言 | 第53-54页 |
| 1 实验材料 | 第54-59页 |
| 1.1 实验动物 | 第54页 |
| 1.2 生化与分子细胞生物学试剂 | 第54-55页 |
| 1.3 主要溶液配方 | 第55-57页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 1.5 PCR引物设计与合成 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-65页 |
| 2.1 细胞培养、细胞因子刺激及抑制剂作用 | 第59-60页 |
| 2.2 放射成像 | 第60页 |
| 2.3 组织病理检测 | 第60页 |
| 2.4 碱性磷酸酶（ALP）活性检测 | 第60-61页 |
| 2.5 耐酒石酸碱性磷酸酶（TRAP）活性检测 | 第61页 |
| 2.6 小鼠血清生化指标及PINP ELISA检测 | 第61-62页 |
| 2.7 骨髓间质细胞成骨诱导实验 | 第62页 |
| 2.8 破骨细胞体外诱导分化实验 | 第62-63页 |
| 2.9 原代培养颅骨成骨细胞 | 第63页 |
| 2.10 成年小鼠骨骼成骨细胞原代培养 | 第63页 |
| 2.11 CCK-8 细胞增殖检测 | 第63-64页 |
| 2.12 RTK蛋白磷酸化芯片 | 第64页 |
| 2.13 测定矿物沉积率（Mimeral Apposition Rate，MAR） | 第64-65页 |
| 2.14 图像处理 | 第65页 |
| 2.15 统计学方法 | 第65页 |
| 3 实验结果 | 第65-75页 |
| 3.1 Fgf9基因S99N突变造成小鼠骨密度增加 | 第65-67页 |
| 3.2 Fgf9~(wt/mt)小鼠成骨能力增强、破骨能力减弱 | 第67-70页 |
| 3.3 S99N突变增加骨髓间质细胞向成骨分化及矿化能力 | 第70-71页 |
| 3.4 FGF9显著抑制成骨相关基因表达 | 第71-73页 |
| 3.5 Fgf9对成骨的抑制作用部分通过MAPK和PI3K/AKT通路 | 第73-75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 第三部分 Fgf9基因在牙齿发育中的作用及机制研究 | 第77-104页 |
| 前言 | 第77-78页 |
| 1 实验材料 | 第78-83页 |
| 1.1 实验动物 | 第78-79页 |
| 1.2 生化与分子细胞生物学试剂 | 第79-80页 |
| 1.3 主要溶液配方 | 第80-81页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第81页 |
| 1.5 PCR引物设计与合成 | 第81-83页 |
| 2 实验方法 | 第83-90页 |
| 2.1 小鼠全骨架染色 | 第83页 |
| 2.2 放射成像 | 第83页 |
| 2.3 牙齿组织病理检测 | 第83-85页 |
| 2.4 组织免疫荧光染色 | 第85页 |
| 2.5 胚胎期小鼠牙齿BrdU掺入法增殖检测 | 第85页 |
| 2.6 原位TUNEL细胞凋亡检测 | 第85-86页 |
| 2.7 小鼠牙齿组织基因表达检测 | 第86页 |
| 2.8 细胞培养及转染 | 第86-87页 |
| 2.9 CRISPR/Cas9系统敲除小鼠来源细胞系Fgf9基因 | 第87-88页 |
| 2.10 原代培养小鼠牙齿上皮干细胞（DESC）及诱导分化 | 第88-89页 |
| 2.11 CCK-8 细胞增殖检测 | 第89页 |
| 2.12 图像处理 | 第89-90页 |
| 2.13 统计学方法 | 第90页 |
| 3 实验结果 | 第90-101页 |
| 3.1 Fgf9基因Ser99Asp（S99N）突变造成小鼠牙齿发育障碍 | 第90-92页 |
| 3.2 Fgf9~(mt/mt)小鼠成釉细胞出现结构紊乱数量减少 | 第92-94页 |
| 3.3 Fgf9基因S99N突变显著影响牙齿牙釉质生成过程 | 第94-96页 |
| 3.4 Fgf9基因S99N突变对小鼠牙齿上皮和间质细胞增殖、凋亡无显著影响 | 第96-98页 |
| 3.5 FGF信号在Fgf9~(mt/mt)小鼠牙齿中出现下调 | 第98-100页 |
| 3.6 Fgf9对成釉细胞增殖、分化的影响 | 第100-101页 |
| 4 讨论 | 第101-104页 |
| 参考文献 | 第104-109页 |
| 结论 | 第109-111页 |
| 第一部分 FGF9基因在多发性骨性粘连综合症中的作用机制及其对关节发育的影响 | 第109页 |
| 第二部分 Fgf9基因在骨代谢平衡中的作用及其机制 | 第109页 |
| 第三部分 Fgf9基因在牙齿发育中的作用及机制研究 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-114页 |
| 学术论文和科研成果目录 | 第114-116页 |
