| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 乳酸菌过度产酸对酸奶品质的影响 | 第10-12页 |
| 1.1.1 通过添加外来物控制菌的生长和产酸能力 | 第11页 |
| 1.1.2 在酸奶发酵剂中调整保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的比例 | 第11-12页 |
| 1.1.3 生物技术育种 | 第12页 |
| 1.2 乳酸菌耐酸受机制的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 乳酸菌酸耐受机制的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.2 保加利亚乳杆菌酸耐受机制的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 基于高通量测序技术的乳酸菌酸耐受机制解析 | 第15-17页 |
| 1.3.1 基因组学 | 第15页 |
| 1.3.2 转录组学 | 第15-16页 |
| 1.3.3 半定量RT-PCR技术 | 第16-17页 |
| 1.4 提升乳酸菌酸胁迫抗性的策略研究 | 第17-18页 |
| 1.4.1 代谢途径策略提升乳酸菌酸胁迫抗性 | 第17页 |
| 1.4.2 基于乳酸菌应激反应机制提升乳酸菌酸胁迫抗性 | 第17-18页 |
| 1.5 本文研究的内容和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料 | 第19-25页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.2 培养基 | 第19页 |
| 2.3 试剂 | 第19-20页 |
| 2.3.1 主要生化试剂 | 第19-20页 |
| 2.3.2 主要分子生物学试剂 | 第20页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.5 试验试剂及缓冲液的配制 | 第21-23页 |
| 2.5.1 基因组提取试剂 | 第21页 |
| 2.5.2 大肠杆菌感受态制备相关试剂的配制 | 第21页 |
| 2.5.3 大肠杆菌质粒提取试剂 | 第21页 |
| 2.5.4 保加利亚乳杆菌ATCC 11842原生质体制备试剂 | 第21-22页 |
| 2.5.5 乳酸菌质粒提取试剂 | 第22页 |
| 2.5.6 其它试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.6 引物设计 | 第23-25页 |
| 3 试验方法 | 第25-41页 |
| 3.1 真空冷冻干燥的保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株的复苏培养及分子鉴定 | 第25-27页 |
| 3.1.1 菌株的复苏培养 | 第25页 |
| 3.1.2 菌株的分子鉴定 | 第25-27页 |
| 3.2 保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株在MRS和RSM复原脱脂乳培养基中的生长特性及产酸特性的研究 | 第27-28页 |
| 3.2.1 保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株在MRS培养基中的生长曲线 | 第27-28页 |
| 3.2.2 保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株在RSM复原脱脂乳培养基中的生长曲线及产酸特性 | 第28页 |
| 3.3 保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株在RSM复原脱脂乳中发酵不同时期总RNA的提取及反转录 | 第28-31页 |
| 3.3.1 不同发酵时期保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株总RNA的提取 | 第28-30页 |
| 3.3.2 提取总RNA的质量检测 | 第30页 |
| 3.3.3 反转录 | 第30-31页 |
| 3.4 半定量RT-PCR | 第31-33页 |
| 3.5 tpiA基因的克隆及功能分析 | 第33-41页 |
| 3.5.1 tpiA基因的PCR克隆 | 第33-35页 |
| 3.5.2 DNA的回收纯化及测序 | 第35页 |
| 3.5.3 大肠杆菌DH5a中提取质粒pMG36e及单酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.5.4 tpiA基因的超量表达载体和反义载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.5.5 重组载体电击转化电转化大肠杆菌 | 第37-39页 |
| 3.5.6 质粒pMG36e和重组载体V1电击转化电转化保加利亚乳杆菌ATCC 11842 | 第39-40页 |
| 3.5.7 后酸化关键基因的功能分析 | 第40-41页 |
| 4 结果与分析 | 第41-56页 |
| 4.1 保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株在光学显微镜下的形态和菌落形态 | 第41-42页 |
| 4.2 保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株在MRS液体培养基中的生长曲线和产酸特性 | 第42-43页 |
| 4.3 保加利亚乳杆菌ATCC 11842菌株在RSM复原脱脂乳培养基中的生长特性和产酸特性 | 第43-46页 |
| 4.4 4个不同发酵时期的总RNA的提取及定量分析 | 第46-49页 |
| 4.4.1 不同的细胞裂解方案对总RNA提取的影响 | 第46-47页 |
| 4.4.2 不同的醇沉条件对总RNA提取的影响 | 第47-49页 |
| 4.5 半定量RT-PCR检测基因转录水平差异 | 第49-50页 |
| 4.6 tpiA基因的克隆及功能分析 | 第50-56页 |
| 4.6.1 tpiA基因的PCR扩增 | 第50-51页 |
| 4.6.2 质粒pMG36e提取及验证结果 | 第51-52页 |
| 4.6.3 重组载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.6.4 tpiA基因的功能分析 | 第54-56页 |
| 5 讨论 | 第56-59页 |
| 5.1 酸奶后酸化问题 | 第56页 |
| 5.2 脱脂乳中乳酸菌总RNA的提取 | 第56-57页 |
| 5.3 tpiA基因的简介及作用机理 | 第57-59页 |
| 6 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-68页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
