| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 引言 | 第13-29页 |
| 1.1 褐藻胶 | 第13-15页 |
| 1.1.1 褐藻胶的来源 | 第13页 |
| 1.1.2 褐藻胶的结构与性质 | 第13-14页 |
| 1.1.3 褐藻胶的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 褐藻寡糖 | 第15-18页 |
| 1.2.1 褐藻寡糖的应用 | 第15页 |
| 1.2.2 褐藻寡糖的制备 | 第15-18页 |
| 1.3 褐藻胶裂解酶 | 第18-27页 |
| 1.3.1 褐藻胶裂解酶的来源 | 第18-19页 |
| 1.3.2 褐藻胶裂解酶的分类 | 第19-20页 |
| 1.3.3 褐藻胶裂解酶的降解作用机理 | 第20页 |
| 1.3.4 褐藻胶裂解酶底物特异性 | 第20-21页 |
| 1.3.5 褐藻胶裂解酶的生物信息学研究 | 第21-22页 |
| 1.3.6 褐藻胶裂解酶活力测定方法 | 第22-23页 |
| 1.3.7 褐藻胶裂解酶的产业化动态 | 第23页 |
| 1.3.8 褐藻胶裂解酶在生物燃料中的应用 | 第23-24页 |
| 1.3.9 不同微生物来源褐藻胶裂解酶菌株的筛选 | 第24-25页 |
| 1.3.10 不同来源的褐藻胶裂解酶基因的异源表达 | 第25-27页 |
| 1.4 本研究的意义 | 第27-29页 |
| 第二章 产褐藻胶裂解酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件研究 | 第29-39页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 材料与设备 | 第29-30页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第29页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第29-30页 |
| 2.2.3 培养基 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 产褐藻胶裂解酶菌株的筛选 | 第30页 |
| 2.3.2 蛋白含量的测定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 酶活力的测定 | 第31页 |
| 2.3.4 菌种的鉴定 | 第31页 |
| 2.3.5 菌株产酶条件的优化 | 第31页 |
| 2.3.6 菌株生长曲线及产酶曲线的测定 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.4.1 产褐藻胶裂解酶菌株的筛选 | 第32页 |
| 2.4.2 菌种的鉴定 | 第32-34页 |
| 2.4.3 菌株产酶条件的优化 | 第34-38页 |
| 2.4.3.1 温度对产酶的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.3.2 初始pH对产酶的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.3.3 接种量对产酶的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.3.4 摇床转速对产酶的影响 | 第37页 |
| 2.4.3.5 菌株SS-1 的生长曲线及产酶曲线测定 | 第37-38页 |
| 2.5 结论 | 第38-39页 |
| 第三章 产褐藻胶裂解酶菌株SS-1 发酵培养基优化 | 第39-51页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 材料与设备 | 第39-40页 |
| 3.2.1 菌种来源 | 第39-40页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第40页 |
| 3.2.3 仪器与设备 | 第40页 |
| 3.3 试验方法 | 第40-42页 |
| 3.3.1 单因素实验设计 | 第40-41页 |
| 3.3.1.1 不同碳源对菌株产酶活力的影响 | 第40页 |
| 3.3.1.2 不同氮源对菌株产酶活力的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.1.3 不同无机盐对菌株产酶活力的影响 | 第41页 |
| 3.3.2 Plackett-Burman实验设计 | 第41页 |
| 3.3.3 最陡爬坡实验 | 第41-42页 |
| 3.3.4 Box-Behnken实验设计 | 第42页 |
| 3.4 结果与分析 | 第42-50页 |
| 3.4.1 单因素实验结果 | 第42-44页 |
| 3.4.1.1 不同碳源对菌株SS-1 酶活力的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.1.2 不同氮源对菌株SS-1 酶活力的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.1.3 不同无机盐对菌株SS-1 酶活力的影响 | 第44页 |
| 3.4.2 Plackett-Burman实验设计结果 | 第44-46页 |
| 3.4.3 最陡爬坡实验结果 | 第46页 |
| 3.4.4 响应面试验结果 | 第46-49页 |
| 3.4.5 最佳发酵条件的验证 | 第49-50页 |
| 3.5 结论 | 第50-51页 |
| 第四章 海洋弧菌褐藻胶裂解酶基因Alg的异源表达 | 第51-62页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 材料与设备 | 第51-52页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第51-52页 |
| 4.2.3 仪器与设备 | 第52页 |
| 4.2.4 培养基 | 第52页 |
| 4.3 试验方法 | 第52-57页 |
| 4.3.1 菌株总DNA的提取 | 第52-53页 |
| 4.3.2 引物设计与PCR反应 | 第53页 |
| 4.3.3 PCR产物与pEASY-T3克隆载体连接 | 第53页 |
| 4.3.4 重组质粒pEASY-T3-Alg的转化 | 第53-54页 |
| 4.3.5 单克隆菌株的筛选和鉴定 | 第54页 |
| 4.3.6 表达载体的构建 | 第54-56页 |
| 4.3.6.1 质粒的抽提取 | 第54-55页 |
| 4.3.6.2 重组质粒的构建 | 第55-56页 |
| 4.3.7 重组质粒的转化 | 第56页 |
| 4.3.8 重组蛋白酶的诱导表达与纯化 | 第56-57页 |
| 4.3.9 重组蛋白酶含量的测定 | 第57页 |
| 4.3.10 重组蛋白酶活力的测定 | 第57页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第57-60页 |
| 4.4.1 海洋弧菌褐藻胶裂解酶基因Alg的克隆 | 第57页 |
| 4.4.2 重组质粒pET28a(+)-Alg的双酶切鉴定 | 第57-58页 |
| 4.4.3 重组酶的诱导表达及蛋白纯化 | 第58-60页 |
| 4.5 结论 | 第60-62页 |
| 第五章 重组褐藻胶裂解酶的酶学性质及分子特性研究 | 第62-75页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 材料与设备 | 第62-63页 |
| 5.2.1 材料与试剂 | 第62页 |
| 5.2.2 仪器与设备 | 第62-63页 |
| 5.3 实验方法 | 第63-64页 |
| 5.3.1 pH值对重组酶活性的影响 | 第63页 |
| 5.3.2 温度对重组酶活性的影响 | 第63页 |
| 5.3.3 金属离子对重组酶活性的影响 | 第63页 |
| 5.3.4 重组酶降解底物特异性研究 | 第63页 |
| 5.3.5 重组酶反应动力学方程的研究 | 第63-64页 |
| 5.3.6 重组酶对多糖降解产物分析 | 第64页 |
| 5.3.7 重组酶的结构特性分析 | 第64页 |
| 5.3.7.1 氨基酸理化特性及三维结构预测 | 第64页 |
| 5.3.7.2 重组酶保守序列分析 | 第64页 |
| 5.3.7.3 重组酶的疏水性分析 | 第64页 |
| 5.4 结果与分析 | 第64-72页 |
| 5.4.1 重组酶最适反应pH及pH稳定性 | 第64-65页 |
| 5.4.2 重组酶最适反应温度及温度稳定性 | 第65页 |
| 5.4.3 金属离子及表面活性剂对重组酶活性的影响 | 第65-66页 |
| 5.4.4 重组酶降解底物特异性研究 | 第66-67页 |
| 5.4.5 重组酶反应动力学方程的研究 | 第67页 |
| 5.4.6 重组酶对多糖降解产物的分析 | 第67-68页 |
| 5.4.7 重组酶结构特性分析 | 第68-72页 |
| 5.4.7.1 氨基酸理化特性及三维结构预测 | 第68-70页 |
| 5.4.7.2 重组酶保守序列分析 | 第70-71页 |
| 5.4.7.3 重组酶的疏水性分析 | 第71-72页 |
| 5.5 结论 | 第72-75页 |
| 全文总结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第89页 |
