| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| ·乳酸的概况 | 第8-12页 |
| ·乳酸的理化性质 | 第8页 |
| ·L-乳酸的用途 | 第8-9页 |
| ·乳酸的生产方法 | 第9页 |
| ·L-乳酸的生产及消费状况 | 第9-10页 |
| ·国内外发酵法生产L-乳酸的研究状况 | 第10-12页 |
| ·乳酸脱氢酶的概况 | 第12-16页 |
| ·乳酸脱氢酶的催化特性 | 第12-13页 |
| ·动物及细菌中LDH 的性质 | 第13-14页 |
| ·细菌L-LDH 的国内外研究状况 | 第14-16页 |
| ·本论文的研究内容及意义 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·菌种与质粒 | 第18页 |
| ·酶与主要试剂 | 第18页 |
| ·主要实验仪器 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·主要溶液的配置 | 第19-21页 |
| ·方法 | 第21-28页 |
| ·干酪乳杆菌基因组的提取 | 第21页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| ·ldhL 基因的扩增 | 第21页 |
| ·PCR 产物或质粒的酶切 | 第21页 |
| ·目的基因和质粒的连接 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第22页 |
| ·重组质粒pET-ldhL 的构建与验证 | 第22页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第22页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第22-23页 |
| ·乳酸脱氢酶酶活及蛋白测定方法 | 第23页 |
| ·L-LDH 反应最适温度和pH 值的确定 | 第23页 |
| ·底物对L-LDH 催化反应速度的影响 | 第23-24页 |
| ·激活剂FBP 和Mn~(2+)对L-LDH 催化反应速度的影响 | 第24页 |
| ·不同二价金属离子对L-LDH 催化反应速度的影响 | 第24页 |
| ·反应产物对酶活力的影响 | 第24页 |
| ·干酪乳杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pMG-ldhL 的构建 | 第25页 |
| ·目的基因在干酪乳杆菌中的表达 | 第25页 |
| ·菌体生长的测定 | 第25页 |
| ·摇瓶发酵培养 | 第25页 |
| ·发酵液中L-乳酸与还原糖的含量测定 | 第25-26页 |
| ·发酵液有机酸的测定 | 第26页 |
| ·菌体干重的测定 | 第26页 |
| ·胞内代谢物的参数测定 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-48页 |
| ·ldhL 基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第28-32页 |
| ·分子克隆 | 第28页 |
| ·重组质粒的构建与验证 | 第28-30页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第30页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·乳酸脱氢酶活性的测定 | 第31-32页 |
| ·乳酸脱氢酶酶学性质的研究 | 第32-39页 |
| ·L-LDH 反应的最适温度及温度稳定性 | 第32-33页 |
| ·L-LDH 反应的最适pH 值及pH 稳定性 | 第33-34页 |
| ·底物对L-LDH 催化反应速度的影响 | 第34-36页 |
| ·激活剂FBP 和Mn~(2+)对L-LDH 催化反应速度的影响 | 第36-37页 |
| ·不同二价金属离子对L-LDH 催化反应速度的影响 | 第37-38页 |
| ·产物对酶活性的影响 | 第38-39页 |
| ·ldhL 基因在干酪乳杆菌中的表达 | 第39-41页 |
| ·ldhL 基因的克隆 | 第39页 |
| ·重组质粒的构建和验证 | 第39-40页 |
| ·ldhL 基因在干酪乳杆菌中的表达 | 第40-41页 |
| ·重组菌L.casei (pMG-ldhL)摇瓶发酵培养 | 第41-44页 |
| ·重组菌的生长曲线的确定 | 第41-42页 |
| ·ldhL 基因在干酪乳杆菌中的表达与酶活分析 | 第42页 |
| ·添加激活剂和烟酸对酶活力的影响 | 第42-44页 |
| ·主要结论 | 第44-45页 |
| ·展望 | 第45-48页 |
| 致谢 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56页 |
