| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-37页 |
| 1.1 水产品中的主要食源性致病菌 | 第13页 |
| 1.2 本文涉及的两种食源性致病菌 | 第13-17页 |
| 1.2.1 副溶血性弧菌 | 第13-15页 |
| 1.2.2 霍利斯格里蒙特氏菌 | 第15-17页 |
| 1.3 食源性致病的检测方法的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.3.1 传统培养法 | 第17页 |
| 1.3.2 以DNA为检测靶点的分子生物学检测方法 | 第17-19页 |
| 1.3.3 以抗原为靶点的免疫学检测方法 | 第19-21页 |
| 1.3.4 其他 | 第21页 |
| 1.4 环介导等温扩增技术及其在水产品中微生物检测的应用 | 第21-29页 |
| 1.4.1 LAMP反应原理 | 第23页 |
| 1.4.2 LAMP在微生物检测中的应用 | 第23-29页 |
| 1.5 活菌检测技术研究 | 第29-30页 |
| 1.5.1 荧光染料法 | 第29-30页 |
| 1.5.2 mRNA逆转录法 | 第30页 |
| 1.5.3 核酸染料抑制剂法 | 第30页 |
| 1.6 数字PCR及其应用 | 第30-34页 |
| 1.6.1 数字PCR的概述 | 第30-31页 |
| 1.6.2 数字PCR的优势 | 第31页 |
| 1.6.3 数字PCR的应用 | 第31-34页 |
| 1.7 本论文研究的目的与内容 | 第34-37页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第35页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第35页 |
| 1.7.3 创新点 | 第35页 |
| 1.7.4 本研究技术路线图 | 第35-37页 |
| 第2章 四重PCR检测副溶血性弧菌及其毒力基因方法的建立 | 第37-46页 |
| 2.1 材料和方法 | 第37-38页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第37-38页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第38页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第38页 |
| 2.2 试验方法 | 第38-40页 |
| 2.2.1 副溶血性弧菌的活化及培养 | 第38页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第38-39页 |
| 2.2.3 基因组DNA的制备 | 第39页 |
| 2.2.4 纯菌悬液DNA模板的提取 | 第39页 |
| 2.2.5 四重PCR体系的建立 | 第39-40页 |
| 2.2.6 四重PCR体系灵敏度试验 | 第40页 |
| 2.2.7 四重PCR体系特异性试验 | 第40页 |
| 2.2.8 人工污染样品检测 | 第40页 |
| 2.3 试验结果 | 第40-44页 |
| 2.3.1 四重体系中的各单重PCR及四重PCR实验结果 | 第40-42页 |
| 2.3.2 四重PCR体系特异性试验结果 | 第42页 |
| 2.3.3 四重PCR体系灵敏度试验结果 | 第42-44页 |
| 2.3.4 模拟样品检测及基因携带判定 | 第44页 |
| 2.4 本章结果及讨论 | 第44-46页 |
| 第3章 副溶血性弧菌IMS-realtime mPCR法的建立及其在水产品中的检测应用 | 第46-59页 |
| 3.1 试验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第46页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第46页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第46页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第46-47页 |
| 3.2 试验方法 | 第47-50页 |
| 3.2.1 副溶血性弧菌免疫磁珠的制备 | 第47-48页 |
| 3.2.2 引物设计与合成 | 第48-49页 |
| 3.2.3 实时多重荧光PCR体系的建立 | 第49页 |
| 3.2.4 引物和探针浓度的优化 | 第49页 |
| 3.2.5 三重荧光PCR灵敏度试验 | 第49-50页 |
| 3.2.6 三重荧光PCR特异性试验 | 第50页 |
| 3.2.7 IMS-realtime mPCR在人工污染样品的检测应用 | 第50页 |
| 3.3 试验结果 | 第50-58页 |
| 3.3.1 副溶血性弧菌免疫磁珠优化结果 | 第50-53页 |
| 3.3.2 引物和探针浓度优化结果 | 第53-54页 |
| 3.3.3 灵敏度试验结果 | 第54-55页 |
| 3.3.4 特异性试验结果 | 第55-56页 |
| 3.3.5 人工污染样品检测结果 | 第56-58页 |
| 3.4 本章小结及讨论 | 第58-59页 |
| 第4章 建立PMA-ddPCR用于副溶血性弧菌活菌绝对定量检测方法 | 第59-68页 |
| 4.1 试验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 试验菌株 | 第59页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第59页 |
| 4.1.3 试验试剂 | 第59-60页 |
| 4.2 试验方法 | 第60-62页 |
| 4.2.1 引物和探针的设计与合成 | 第60页 |
| 4.2.2 反应体系及反应程序 | 第60-61页 |
| 4.2.3 退火温度的优化 | 第61页 |
| 4.2.4 PMA浓度及处理时间的优化 | 第61-62页 |
| 4.2.5 PMA-ddPCR活菌定量线性范围 | 第62页 |
| 4.3 试验结果 | 第62-66页 |
| 4.3.1 双重ddPCR反应体系的建立 | 第62-63页 |
| 4.3.2 退火温度优化结果 | 第63-64页 |
| 4.3.3 PMA条件优化 | 第64-65页 |
| 4.3.4 PMA-ddPCR方法线性范围研究结果 | 第65-66页 |
| 4.4 本章小结及讨论 | 第66-68页 |
| 第5章 霍利斯格里蒙特氏菌IMS-LAMP快速检测法的建立及初步应用 | 第68-79页 |
| 5.1 试验材料 | 第68页 |
| 5.1.1 试验菌株 | 第68页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第68页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第68页 |
| 5.2 试验方法 | 第68-72页 |
| 5.2.1 霍利斯格里蒙特氏菌的活化及培养 | 第68页 |
| 5.2.2 霍利斯格里蒙特氏菌免疫磁珠的制备 | 第68-69页 |
| 5.2.3 LAMP引物的设计和合成 | 第69-70页 |
| 5.2.4 LAMP反应体系及反应程序 | 第70-71页 |
| 5.2.5 Realtime-PCR反应体系及程序 | 第71页 |
| 5.2.6 特异性试验 | 第71页 |
| 5.2.7 灵敏度试验 | 第71页 |
| 5.2.8 人工污染样品的检测 | 第71-72页 |
| 5.3 试验结果 | 第72-78页 |
| 5.3.1 霍利斯格里蒙特氏菌免疫磁珠优化结果 | 第72-74页 |
| 5.3.2 LAMP扩增结果 | 第74-75页 |
| 5.3.3 特异性试验结果 | 第75-76页 |
| 5.3.4 灵敏度实验结果 | 第76-77页 |
| 5.3.5 人工模拟样品检测结果 | 第77-78页 |
| 5.4 本章小结 | 第78-79页 |
| 第6章 多重PCR同时检测副溶血弧菌和霍利斯格里蒙霍特氏菌及其致病因子 | 第79-89页 |
| 6.1 试验材料 | 第79页 |
| 6.1.1 试验菌株 | 第79页 |
| 6.1.2 主要仪器设备 | 第79页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第79页 |
| 6.2 试验方法 | 第79-82页 |
| 6.2.1 引物设计 | 第79-80页 |
| 6.2.2 基因组DNA的提取 | 第80页 |
| 6.2.3 菌液中DNA的提取 | 第80页 |
| 6.2.4 单重PCR体系的建立 | 第80页 |
| 6.2.5 多重PCR体系的建立 | 第80-81页 |
| 6.2.6 多重PCR灵敏度检测 | 第81-82页 |
| 6.2.7 多重PCR特异性检测 | 第82页 |
| 6.2.8 实际样品的初步应用 | 第82页 |
| 6.3 试验结果 | 第82-88页 |
| 6.3.1 单重PCR扩增结果 | 第82-83页 |
| 6.3.2 多重PCR退火温度优化结果 | 第83-84页 |
| 6.3.3 多重PCR体系引物浓度优化 | 第84-85页 |
| 6.3.4 灵敏度试验结果 | 第85-87页 |
| 6.3.5 特异性的测定 | 第87页 |
| 6.3.6 实际样品检测结果 | 第87-88页 |
| 6.4 本章小结 | 第88-89页 |
| 第7章 结论与展望 | 第89-91页 |
| 7.1 结论 | 第89-90页 |
| 7.2 展望 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-108页 |
| 在学期间科研成果情况 | 第108页 |
