| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌研究概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 枯草芽孢杆菌的基本性质 | 第11页 |
| 1.1.2 枯草芽孢杆菌芽孢结构及生理特性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 枯草芽孢杆菌的应用 | 第12-13页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌芽孢表面展示系统研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.2.2 芽孢表面展示技术 | 第14-15页 |
| 1.3 芽孢萌发机制的研究 | 第15-17页 |
| 1.3.1 芽孢的萌发过程 | 第15页 |
| 1.3.2 萌发剂对芽孢萌发的刺激作用 | 第15-17页 |
| 1.4 重叠延伸PCR技术 | 第17-20页 |
| 1.4.1 重叠延伸PCR技术的建立 | 第17-18页 |
| 1.4.2 重叠延伸PCR技术的原理 | 第18-19页 |
| 1.4.3 重叠延伸PCR技术的特点 | 第19-20页 |
| 1.4.4 重叠延伸PCR技术的应用 | 第20页 |
| 1.5 本课题的立题背景及研究内容 | 第20-23页 |
| 1.5.1 立题背景 | 第20-21页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第21-23页 |
| 第2章 枯草芽孢杆菌高产芽孢发酵条件的研究 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.1 实验原料 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 仪器及设备 | 第24页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 利用单因素试验筛选培养基组分 | 第24-25页 |
| 2.2.2 添加范围的单因素试验 | 第25页 |
| 2.2.3 菌落计数方法 | 第25页 |
| 2.2.4 设计正交试验 | 第25页 |
| 2.2.5 Mn~(2+)浓度对芽孢生成的影响 | 第25-26页 |
| 2.2.6 优化培养条件 | 第26页 |
| 2.2.7 培养基及培养条件优化后的验证实验 | 第26页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第26-34页 |
| 2.3.1 培养基组分单因素筛选试验结果 | 第26-28页 |
| 2.3.2 添加范围的单因素试验结果 | 第28-30页 |
| 2.3.3 正交试验结果 | 第30-31页 |
| 2.3.4 Mn~(2+)浓度对芽孢生成的影响结果 | 第31-32页 |
| 2.3.5 培养条件优化结果 | 第32-34页 |
| 2.3.6 验证优化后培养基及培养条件的实验结果 | 第34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 第3章 芽孢萌发缺陷型工程菌的构建 | 第35-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验原料 | 第36页 |
| 3.1.2 引物 | 第36页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.4 仪器与设备 | 第36-37页 |
| 3.1.5 器具的处理及试剂配制 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.2.1 基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.2.2 质粒的提取 | 第38页 |
| 3.2.3 扩增同源臂和抗性标记基因 | 第38-39页 |
| 3.2.4 利用重叠PCR技术扩增重叠敲除片段 | 第39-40页 |
| 3.2.5 重叠敲除片段的酶切和浓缩 | 第40-41页 |
| 3.2.6 电转感受态的制备 | 第41页 |
| 3.2.7 sleB1-kmr敲除片段的电转化及阳性重组菌株鉴定 | 第41页 |
| 3.2.8 cwlJ1-zeor敲除片段的电转化及阳性重组菌株鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-45页 |
| 3.3.1 基因组DNA的提取结果 | 第42页 |
| 3.3.2 质粒的提取结果 | 第42-43页 |
| 3.3.3 同源臂及抗性基因的获取 | 第43页 |
| 3.3.4 重叠敲除片段的获取 | 第43-44页 |
| 3.3.5 sleB1-kmr敲除片段的电转化及阳性重组菌株鉴定结果 | 第44页 |
| 3.3.6 cwlJ1-zeor敲除片段的电转化及阳性重组菌株鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第4章 芽孢萌发缺陷型工程菌的发酵研究 | 第47-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验原料 | 第47-48页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第48页 |
| 4.1.3 仪器及设备 | 第48页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ典型生长曲线的测定 | 第48页 |
| 4.2.2 B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ产芽孢能力的测定 | 第48-49页 |
| 4.2.3 B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ在LB培养基中芽孢萌发测定 | 第49页 |
| 4.2.4 B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ在麦芽糖转化生成海藻糖体系中芽孢萌发测定 | 第49页 |
| 4.2.5 不同物质对B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ芽孢萌发的影响 | 第49-50页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第50-53页 |
| 4.3.1 B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ典型生长曲线 | 第50页 |
| 4.3.2 B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ产芽孢能力结果 | 第50-51页 |
| 4.3.3 B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ在LB培养基中的芽孢萌发结果 | 第51-52页 |
| 4.3.4 B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ在麦芽糖转化生成海藻糖体系中芽孢萌发测定 | 第52页 |
| 4.3.5 不同营养物质对B. subtilis 168 ΔsleBΔcwlJ芽孢萌发的影响 | 第52-53页 |
| 4.4 本章小结 | 第53-55页 |
| 第5章 总结与展望 | 第55-57页 |
| 5.1 总结 | 第55-56页 |
| 5.2 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 硕士期间主要科研成果 | 第65页 |
