| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 长链二元酸概述 | 第12-13页 |
| 1.2 长链二元酸的生产方法 | 第13-14页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第13页 |
| 1.2.2 植物油裂解法 | 第13页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第13-14页 |
| 1.3 长链二元酸生产现状 | 第14页 |
| 1.4 长链二元酸的研究现状 | 第14-20页 |
| 1.4.1 生产长链二元酸的微生物 | 第14-15页 |
| 1.4.2 烷烃在热带假丝酵母中的代谢途径及相关酶系 | 第15-18页 |
| 1.4.3 产酸优势菌株的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4.4 长链二元酸的发酵工艺 | 第20页 |
| 1.5 立题背景和研究内容 | 第20-22页 |
| 1.5.1 立题背景 | 第20页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第20-22页 |
| 第2章 热带假丝酵母pxa1基因单拷贝缺失菌的构建 | 第22-36页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 主要材料和设备 | 第22-23页 |
| 2.2.1 菌种、质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2.4 培养基 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.3.1 热带假丝酵母基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.2 引物设计 | 第24页 |
| 2.3.3 同源臂pxa1p1获取 | 第24-25页 |
| 2.3.4 质粒pPIC9K的提取 | 第25页 |
| 2.3.5 抗性基因kanr的克隆 | 第25页 |
| 2.3.6 敲除片段的构建 | 第25-27页 |
| 2.3.7 同源重组片段pxa1p1-kanr酶切及浓缩 | 第27页 |
| 2.3.8 热带假丝酵母1798感受态的制备 | 第27-28页 |
| 2.3.9 电转化 | 第28页 |
| 2.3.10 阳性重组菌株的鉴定 | 第28页 |
| 2.3.11 C. tropicalis 1798-pxa1菌株pxa1基因表达量 | 第28页 |
| 2.3.12 种子培养 | 第28-29页 |
| 2.3.13 发酵培养 | 第29页 |
| 2.3.14 十二碳二元酸的提取与测定 | 第29页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第29-35页 |
| 2.4.1 氨基酸序列比对 | 第29-30页 |
| 2.4.2 热带假丝酵母1798对G418敏感性实验 | 第30-32页 |
| 2.4.3 质粒pPIC9K的提取 | 第32页 |
| 2.4.4 C. tropicalis 1798-pxa1工程菌的构建 | 第32-33页 |
| 2.4.5 pxa1p1-kanr电转化及鉴定 | 第33页 |
| 2.4.6 C. tropicalis 1798、C. tropicalis 1798-pxa1菌株中pxa1基因表达量 | 第33-34页 |
| 2.4.7 C.tropicalis1798、C.tropicalis1798-pxa1生长曲线 | 第34页 |
| 2.4.8 以十二烷为底物C.tropicalis 1798-pxa1发酵验证 | 第34-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第3章 热带假丝酵母pxa1基因双拷贝缺失菌的构建 | 第36-48页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 主要材料和设备 | 第36页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第36页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第36页 |
| 3.2.4 培养基 | 第36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-41页 |
| 3.3.1 质粒pFA6a-hphMX-tetO-Pcyc1-3xFLAG的提取 | 第36-37页 |
| 3.3.2 敲除引物的设计 | 第37页 |
| 3.3.3 同源臂pxa1p2的获取 | 第37-38页 |
| 3.3.4 敲除载体pFA6a-pxa1p2的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.5 敲除载体pFA6A-pxa1p2酶切及浓缩 | 第39-40页 |
| 3.3.6 C.tropicalis 1798-pxa1感受态的制备 | 第40页 |
| 3.3.7 热带假丝酵母pxa1基因双拷贝缺失菌的电转化 | 第40页 |
| 3.3.8 转化子的验证 | 第40-41页 |
| 3.3.9 种子培养 | 第41页 |
| 3.3.10 发酵培养 | 第41页 |
| 3.3.11 十二碳二元酸的提取与测定 | 第41页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第41-47页 |
| 3.4.1 潮霉素B对C.tropicalis 1798-pxa1的敏感性实验 | 第41-42页 |
| 3.4.2 质粒pFA6a-hphMX-tetO-Pcyc1-3xFLAG的提取 | 第42页 |
| 3.4.3 PCR获得同源臂pxa1p2 | 第42-43页 |
| 3.4.4 敲除载体pFA6a- pxa1p2的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4.5 pxa1基因的双拷贝敲除及鉴定 | 第44页 |
| 3.4.6 C.tropicalis1798、C.tropicalis1798-pxa1、C.tropicalis1798-pxa1p2生长曲线 | 第44-46页 |
| 3.4.7 以十二烷为底物C.tropicalis 1798-pxa1p2发酵验证 | 第46-47页 |
| 3.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第4章 C.tropicalis 1798-pxa1发酵工艺优化 | 第48-60页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 主要材料和设备 | 第48-49页 |
| 4.2.1 菌种 | 第48页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第48页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第48页 |
| 4.2.4 培养基 | 第48-49页 |
| 4.3 实验设计和数据分析 | 第49-50页 |
| 4.3.1 C. tropicalis 1798-pxa1产十二碳二元酸培养基优化 | 第49页 |
| 4.3.2 C. tropicalis 1798-pxa1产十二碳二元酸发酵条件优化 | 第49-50页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第50-57页 |
| 4.4.1 三角瓶和挡板瓶对十二碳二元酸发酵的影响 | 第50页 |
| 4.4.2 Plackett-Burman(PB)法实验 | 第50-52页 |
| 4.4.3 单因素实验 | 第52-54页 |
| 4.4.4 正交试验 | 第54-55页 |
| 4.4.5 温度对十二碳二元酸产量的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.6 发酵十二碳二元酸最适pH的确定 | 第56-57页 |
| 4.5 本章小结 | 第57-60页 |
| 第5章 结论与展望 | 第60-64页 |
| 5.1 结论 | 第60-61页 |
| 5.2 展望 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第72页 |
