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热带假丝酵母pxa1基因敲除及对长链二元酸产量的影响

摘要第8-10页
ABSTRACT第10-11页
第1章 绪论第12-22页
    1.1 长链二元酸概述第12-13页
    1.2 长链二元酸的生产方法第13-14页
        1.2.1 化学合成法第13页
        1.2.2 植物油裂解法第13页
        1.2.3 微生物发酵法第13-14页
    1.3 长链二元酸生产现状第14页
    1.4 长链二元酸的研究现状第14-20页
        1.4.1 生产长链二元酸的微生物第14-15页
        1.4.2 烷烃在热带假丝酵母中的代谢途径及相关酶系第15-18页
        1.4.3 产酸优势菌株的研究进展第18-20页
        1.4.4 长链二元酸的发酵工艺第20页
    1.5 立题背景和研究内容第20-22页
        1.5.1 立题背景第20页
        1.5.2 研究内容第20-22页
第2章 热带假丝酵母pxa1基因单拷贝缺失菌的构建第22-36页
    2.1 引言第22页
    2.2 主要材料和设备第22-23页
        2.2.1 菌种、质粒第22页
        2.2.2 主要试剂第22-23页
        2.2.3 主要仪器第23页
        2.2.4 培养基第23页
    2.3 实验方法第23-29页
        2.3.1 热带假丝酵母基因组DNA的提取第23-24页
        2.3.2 引物设计第24页
        2.3.3 同源臂pxa1p1获取第24-25页
        2.3.4 质粒pPIC9K的提取第25页
        2.3.5 抗性基因kanr的克隆第25页
        2.3.6 敲除片段的构建第25-27页
        2.3.7 同源重组片段pxa1p1-kanr酶切及浓缩第27页
        2.3.8 热带假丝酵母1798感受态的制备第27-28页
        2.3.9 电转化第28页
        2.3.10 阳性重组菌株的鉴定第28页
        2.3.11 C. tropicalis 1798-pxa1菌株pxa1基因表达量第28页
        2.3.12 种子培养第28-29页
        2.3.13 发酵培养第29页
        2.3.14 十二碳二元酸的提取与测定第29页
    2.4 实验结果与讨论第29-35页
        2.4.1 氨基酸序列比对第29-30页
        2.4.2 热带假丝酵母1798对G418敏感性实验第30-32页
        2.4.3 质粒pPIC9K的提取第32页
        2.4.4 C. tropicalis 1798-pxa1工程菌的构建第32-33页
        2.4.5 pxa1p1-kanr电转化及鉴定第33页
        2.4.6 C. tropicalis 1798、C. tropicalis 1798-pxa1菌株中pxa1基因表达量第33-34页
        2.4.7 C.tropicalis1798、C.tropicalis1798-pxa1生长曲线第34页
        2.4.8 以十二烷为底物C.tropicalis 1798-pxa1发酵验证第34-35页
    2.5 本章小结第35-36页
第3章 热带假丝酵母pxa1基因双拷贝缺失菌的构建第36-48页
    3.1 引言第36页
    3.2 主要材料和设备第36页
        3.2.1 菌种和质粒第36页
        3.2.2 主要试剂第36页
        3.2.3 主要仪器第36页
        3.2.4 培养基第36页
    3.3 实验方法第36-41页
        3.3.1 质粒pFA6a-hphMX-tetO-Pcyc1-3xFLAG的提取第36-37页
        3.3.2 敲除引物的设计第37页
        3.3.3 同源臂pxa1p2的获取第37-38页
        3.3.4 敲除载体pFA6a-pxa1p2的构建第38-39页
        3.3.5 敲除载体pFA6A-pxa1p2酶切及浓缩第39-40页
        3.3.6 C.tropicalis 1798-pxa1感受态的制备第40页
        3.3.7 热带假丝酵母pxa1基因双拷贝缺失菌的电转化第40页
        3.3.8 转化子的验证第40-41页
        3.3.9 种子培养第41页
        3.3.10 发酵培养第41页
        3.3.11 十二碳二元酸的提取与测定第41页
    3.4 实验结果与讨论第41-47页
        3.4.1 潮霉素B对C.tropicalis 1798-pxa1的敏感性实验第41-42页
        3.4.2 质粒pFA6a-hphMX-tetO-Pcyc1-3xFLAG的提取第42页
        3.4.3 PCR获得同源臂pxa1p2第42-43页
        3.4.4 敲除载体pFA6a- pxa1p2的构建及鉴定第43-44页
        3.4.5 pxa1基因的双拷贝敲除及鉴定第44页
        3.4.6 C.tropicalis1798、C.tropicalis1798-pxa1、C.tropicalis1798-pxa1p2生长曲线第44-46页
        3.4.7 以十二烷为底物C.tropicalis 1798-pxa1p2发酵验证第46-47页
    3.5 本章小结第47-48页
第4章 C.tropicalis 1798-pxa1发酵工艺优化第48-60页
    4.1 引言第48页
    4.2 主要材料和设备第48-49页
        4.2.1 菌种第48页
        4.2.2 主要试剂第48页
        4.2.3 主要仪器第48页
        4.2.4 培养基第48-49页
    4.3 实验设计和数据分析第49-50页
        4.3.1 C. tropicalis 1798-pxa1产十二碳二元酸培养基优化第49页
        4.3.2 C. tropicalis 1798-pxa1产十二碳二元酸发酵条件优化第49-50页
    4.4 实验结果与讨论第50-57页
        4.4.1 三角瓶和挡板瓶对十二碳二元酸发酵的影响第50页
        4.4.2 Plackett-Burman(PB)法实验第50-52页
        4.4.3 单因素实验第52-54页
        4.4.4 正交试验第54-55页
        4.4.5 温度对十二碳二元酸产量的影响第55-56页
        4.4.6 发酵十二碳二元酸最适pH的确定第56-57页
    4.5 本章小结第57-60页
第5章 结论与展望第60-64页
    5.1 结论第60-61页
    5.2 展望第61-64页
参考文献第64-70页
致谢第70-72页
在学期间主要科研成果第72页

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