| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 中英文缩写符号对照表 | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 低温微生物与低温酶 | 第14-15页 |
| 1.1.1 低温微生物的生态分布 | 第14页 |
| 1.1.2 低温微生物适冷分子机制 | 第14页 |
| 1.1.3 低温酶的存在与分子结构特点 | 第14-15页 |
| 1.2 酯酶 | 第15-16页 |
| 1.2.1 酯酶的结构 | 第15页 |
| 1.2.2 酯酶的分类 | 第15-16页 |
| 1.3 低温酯酶研究概况 | 第16-23页 |
| 1.3.1 产低温酯酶的微生物类群及来源 | 第17页 |
| 1.3.2 低温酯酶理化特征 | 第17-18页 |
| 1.3.3 低温酯酶产生菌的选育 | 第18-19页 |
| 1.3.4 低温酯酶的发酵生产 | 第19-20页 |
| 1.3.5 低温酯酶的分离纯化 | 第20页 |
| 1.3.6 低温酯酶基因的克隆表达与定向进化 | 第20-22页 |
| 1.3.7 低温酯酶在奶制品香精基料制备中的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 立题依据与研究意义 | 第23页 |
| 1.5 论文的主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 天山1号冰川细菌源低温酯酶产生菌的筛选及鉴定 | 第25-38页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 材料与设备 | 第25-26页 |
| 2.2.1 样品的采集与前处理 | 第25页 |
| 2.2.2 主要材料与试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 | 第26页 |
| 2.2.4 培养基 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.3.1 冻土及冰川融水微生物的筛分 | 第26-27页 |
| 2.3.2 产酯酶菌株的初筛 | 第27页 |
| 2.3.3 产酯酶菌株的复筛 | 第27页 |
| 2.3.4 酯酶活力测定方法 | 第27-28页 |
| 2.3.5 酯酶底物特异性的测定 | 第28页 |
| 2.3.6 菌株生长特性测定 | 第28-29页 |
| 2.3.7 菌株形态学和生理生化鉴定 | 第29页 |
| 2.3.8 分子生物学鉴定 | 第29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-37页 |
| 2.4.1 冰川融水及冻土耐冷可培养细菌的分离 | 第29-31页 |
| 2.4.2 产酯酶菌株的初筛 | 第31-32页 |
| 2.4.3 产酯酶菌株的复筛 | 第32-33页 |
| 2.4.4 菌株T1-39 酶液底物特异性分析 | 第33-34页 |
| 2.4.5 产酯酶菌株生长特性 | 第34页 |
| 2.4.6 产酯酶菌株的常规分类鉴定 | 第34-36页 |
| 2.4.7 产酯酶菌株分子生物学鉴定 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 耐冷菌Pseudomonas sp.T1-39 的等离子体诱变及突变株产酶发酵工艺研究 | 第38-52页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 材料与设备 | 第38-39页 |
| 3.2.1 主要材料与试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第39页 |
| 3.2.3 培养基 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 前期准备工作 | 第39页 |
| 3.3.2 ARTP诱变 | 第39-40页 |
| 3.3.3 高产低温酯酶突变菌株的筛选 | 第40页 |
| 3.3.4 酯酶酶活测定 | 第40页 |
| 3.3.5 突变株遗传稳定性分析 | 第40页 |
| 3.3.6 突变株增殖速率的测定 | 第40页 |
| 3.3.7 突变株酯酶底物特异性研究 | 第40页 |
| 3.3.8 突变株发酵产酶培养基优化 | 第40-41页 |
| 3.3.9 突变株发酵产酶条件优化 | 第41-42页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第42-51页 |
| 3.4.1 ARTP诱变致死率曲线 | 第42页 |
| 3.4.2 高产低温酯酶突变株的筛选 | 第42-43页 |
| 3.4.3 突变株遗传稳定性分析 | 第43-44页 |
| 3.4.4 突变株增殖速率测定 | 第44页 |
| 3.4.5 发酵产酶培养基的优化 | 第44-48页 |
| 3.4.6 发酵条件优化 | 第48-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 Pseudomonas sp.TB11低温酯酶的分离纯化和酶学性质研究 | 第52-67页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 材料与设备 | 第52-53页 |
| 4.2.1 主要材料与试剂 | 第52-53页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第53页 |
| 4.2.3 培养基 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 4.3.1 酯酶活性测定方法 | 第53页 |
| 4.3.2 蛋白质含量的测定 | 第53页 |
| 4.3.3 Pseudomonas sp.TB11发酵液的制备 | 第53页 |
| 4.3.4 硫酸铵沉淀 | 第53-54页 |
| 4.3.5 透析 | 第54页 |
| 4.3.6 离子交换层析 | 第54页 |
| 4.3.7 凝胶过滤层析 | 第54页 |
| 4.3.8 回收率及提纯倍数计算 | 第54-55页 |
| 4.3.9 SDS-PAGE电泳鉴定和酶谱分析 | 第55页 |
| 4.3.10 肽指纹图谱分析和蛋白鉴定 | 第55页 |
| 4.3.11 N-端氨基酸序列分析 | 第55页 |
| 4.3.12 酯酶酶学性质分析 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-66页 |
| 4.4.1 酯酶EstTB11的分离纯化 | 第56-59页 |
| 4.4.2 酯酶EstTB11的分子质量 | 第59-60页 |
| 4.4.3 肽指纹图谱序列分析 | 第60-61页 |
| 4.4.4 酯酶EstTB11的N-末端氨基酸序列测定 | 第61-62页 |
| 4.4.5 酯酶EstTB11的底物特异性 | 第62-63页 |
| 4.4.6 酯酶EstTB11的最适p H及p H稳定性 | 第63页 |
| 4.4.7 酯酶EstTB11的最适温度及热稳定性 | 第63-65页 |
| 4.4.8 金属离子对酯酶Est TB11活性的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.9 酯酶EstTB11的酶反应动力学 | 第66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 Pseudomonas sp.TB11低温酯酶基因的克隆表达、纯化及性质研究 | 第67-92页 |
| 5.1 前言 | 第67页 |
| 5.2 材料与设备 | 第67-68页 |
| 5.2.1 主要材料与试剂 | 第67-68页 |
| 5.2.2 主要仪器与设备 | 第68页 |
| 5.2.3 培养基 | 第68页 |
| 5.2.4 主要数据库和软件 | 第68页 |
| 5.3 实验方法 | 第68-75页 |
| 5.3.1 Pseudomonas sp.TB11基因组的提取 | 第68页 |
| 5.3.2 引物设计 | 第68-69页 |
| 5.3.3 酯酶基因片段的扩增 | 第69页 |
| 5.3.4 测序及序列比对 | 第69页 |
| 5.3.5 酯酶基因全长的克隆 | 第69-71页 |
| 5.3.6 酯酶结构预测 | 第71页 |
| 5.3.7 酯酶基因est T的克隆 | 第71-73页 |
| 5.3.8 酯酶基因est T的表达与纯化 | 第73-74页 |
| 5.3.9 重组酯酶rest T酶学性质分析 | 第74-75页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第75-90页 |
| 5.4.1 Pseudomonas sp.TB11基因组DNA的提取 | 第75页 |
| 5.4.2 引物设计 | 第75-76页 |
| 5.4.3 Pseudomonas sp.TB11酯酶基因est T的克隆 | 第76-77页 |
| 5.4.4 基因序列的分析 | 第77-79页 |
| 5.4.5 est T酯酶基因的生物信息学分析 | 第79-82页 |
| 5.4.6 est T酯酶基因重组表达载体的构建 | 第82-83页 |
| 5.4.7 融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第83-85页 |
| 5.4.8 包涵体蛋白的复性 | 第85-86页 |
| 5.4.9 rest T底物特异性分析 | 第86页 |
| 5.4.10 温度对rest T活性和稳定性的影响 | 第86-88页 |
| 5.4.11 p H对rest T活性和稳定性的影响 | 第88-89页 |
| 5.4.12 金属离子和化合物对rest T的影响 | 第89-90页 |
| 5.4.13 restT酶反应动力学常数 | 第90页 |
| 5.5 本章小结 | 第90-92页 |
| 第六章 Pseudomonas sp.TB11低温酯酶在奶味香精基料制备中的应用 | 第92-109页 |
| 6.1 前言 | 第92-93页 |
| 6.2 材料与设备 | 第93页 |
| 6.2.1 主要材料与试剂 | 第93页 |
| 6.2.2 主要仪器和设备 | 第93页 |
| 6.3 实验方法 | 第93-95页 |
| 6.3.1 稀奶油酶解工艺 | 第93-94页 |
| 6.3.2 稀奶油酶解液的酸值测定 | 第94页 |
| 6.3.3 挥发性组分萃取 | 第94页 |
| 6.3.4 GC-MS分析 | 第94-95页 |
| 6.3.5 电子鼻分析 | 第95页 |
| 6.3.6 数据分析 | 第95页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第95-108页 |
| 6.4.1 酯酶rest T与诺维信Palatase 20000L酶解效果比较 | 第95-98页 |
| 6.4.2 rest T和Palatase 20000L酶解产物挥发性化合物对比分析 | 第98-102页 |
| 6.4.3 两种市售奶味香精SPME-GC/MS分析 | 第102-104页 |
| 6.4.4 电子鼻对不同处理样品的鉴定分析 | 第104-108页 |
| 6.5 本章小结 | 第108-109页 |
| 主要结论与展望 | 第109-111页 |
| 主要结论 | 第109-110页 |
| 展望 | 第110-111页 |
| 论文创新点 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-126页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第126页 |
