| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-33页 |
| ·青霉素G酰化酶 | 第11-13页 |
| ·青霉素G酰化酶在β－内酰胺类抗生素生物催化合成中的作用 | 第13-17页 |
| ·1985年以前半合成β－内酰胺类抗生素工业生产 | 第13-14页 |
| ·β－内酰胺类母核的生物催化合成 | 第14-16页 |
| ·酶促侧链与β－内酰胺类母核的耦合 | 第16-17页 |
| ·青霉素G酰化酶的水解与合成特性 | 第17-20页 |
| ·固定化金属亲和层析 | 第20-24页 |
| ·基本原理和步骤 | 第20-22页 |
| ·基质 | 第22页 |
| ·配位基 | 第22-23页 |
| ·洗脱 | 第23-24页 |
| ·蛋白质工程 | 第24-28页 |
| ·有理设计 | 第24-25页 |
| ·定向进化 | 第25-26页 |
| ·获得定向进化多样性新方法之一——DNA混组技术 | 第26-28页 |
| ·本研究的内容与目的 | 第28页 |
| 参考文献 | 第28-33页 |
| 第二章 四种野生型青霉素G酰化酶的克隆、表达、纯化与合成／水解比测定 | 第33-43页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料和方法 | 第33-37页 |
| ·仪器 | 第33-34页 |
| ·质粒与菌种 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·酶和试剂 | 第34页 |
| ·构建HisTag融合表达系统 | 第34-35页 |
| ·发酵与表达 | 第35页 |
| ·纯化 | 第35-36页 |
| ·青霉素G酰化酶活性测定(NIPAB法) | 第36页 |
| ·PGA合成水解比(S／H)的测定 | 第36-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-40页 |
| ·表达载体的构建 | 第37页 |
| ·表达条件优化 | 第37-39页 |
| ·Co~(2+)-IDA agar亲和载体纯化效率 | 第39页 |
| ·四种重组PGA的S／H值 | 第39-40页 |
| ·结论 | 第40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 第三章 青霉素G酰化酶DNA家族混组α亚基嵌合体库的建立及筛选 | 第43-60页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·材料和方法 | 第43-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·酶和化学试剂 | 第44页 |
| ·引物设计与分子克隆 | 第44-45页 |
| ·DNA家族混组中骨架基因的设计 | 第45页 |
| ·五种PGA基因DNA家族混组 | 第45页 |
| ·抑菌圈法筛选嵌合体克隆 | 第45-46页 |
| ·重组克隆的小量发酵 | 第46页 |
| ·HPLC高通量筛选重组克隆 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌周质空间蛋白的小量快速抽提 | 第47页 |
| ·PGA的活力测定(NIPAB法) | 第47页 |
| ·PGA合成水解比(S/H)的测定 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-58页 |
| ·多种PGA氨基酸序列联配和系统发育分析 | 第47-54页 |
| ·DNA家族混组改造PGAα亚基 | 第54-55页 |
| ·PGA基因嵌合库的抑菌圈法筛选 | 第55-56页 |
| ·HPLC高通量筛选重组克隆效果 | 第56-58页 |
| ·结语 | 第58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 论文及专利 | 第60-61页 |
| 已发表论文 | 第60页 |
| 已申请专利 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
