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真菌毒素寡核苷酸适配体的筛选与应用

摘要第1-4页
Abstract第4-6页
目录第6-8页
1 引言第8-16页
   ·真菌毒素的检测意义与方法第8-11页
     ·真菌毒素的检测意义第8-9页
     ·真菌毒素的检测方法第9-11页
   ·SELEX 的研究进展第11-14页
     ·SELEX 技术简介第11页
     ·适配体的优点第11页
     ·适配子筛选方法第11-13页
     ·适配体的应用第13-14页
   ·本课题的立题意义与内容第14-16页
     ·本课题的立题意义第14页
     ·本课题的研究内容第14-16页
2 实验材料与方法第16-24页
   ·材料与主要试剂第16页
     ·随机单链 DNA(ssDNA)文库以及其它 DNA 序列的设计与合成第16页
     ·磁珠与纳米金第16页
     ·主要试剂第16页
   ·主要仪器第16-17页
   ·实验原理第17-19页
     ·SELEX 技术原理第17页
     ·黄曲霉毒素 B_1、B_2活化及与氨基化磁珠连接原理第17-18页
     ·黄曲霉毒素 B_1、B_2寡核苷酸适配子检测方法建立的原理第18-19页
     ·伏马菌素 B_1可视化检测的原理第19页
   ·实验方法第19-24页
     ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2和载体氨基化磁珠的连接第19-20页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2的活化与表征第19-20页
       ·氨基化磁珠的制备与表征第20页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2和载体的连接与表征第20页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2和载体连接条件的优化第20页
     ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2寡核苷酸适配子的筛选第20-21页
       ·随机单链(ssDNA)DNA 文库 PCR 扩增条件优化第21页
       ·AFB_1及 AFB_2孵育洗剂条件的优化第21页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2十轮筛选所得到的 ssDNA 聚丙烯酰胺凝胶电泳第21页
     ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配子的克隆测序及分析第21-22页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配子的克隆测序第21页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配子的克隆测序结果分析第21页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配子的亲和性实验第21-22页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配子的特异性实验第22页
     ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配子的应用第22-23页
       ·亲和素包被磁珠的制备与表征第22页
       ·亲和素用量的优化第22页
       ·亲和素包被的磁珠与生物素标记的 AFB_1及 AFB_2适配子的连接优化第22页
       ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配体的线性范围,检测限和加标回收率第22-23页
     ·基于纳米金标记-适配体识别的伏马菌素 B_1可视化检测新方法第23-24页
       ·纳米金的制备第23页
       ·FB_1的检测第23页
       ·啤酒中 FB_1的加标回收第23-24页
3 结果与讨论第24-47页
   ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2和载体氨基化磁珠的连接第24-27页
     ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2的活化与表征第24-25页
     ·氨基化磁珠的制备与表征第25页
     ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2和载体的连接及表征第25-26页
     ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2和载体连接条件的优化第26-27页
   ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配子的筛选第27-30页
     ·随机单链(ssDNA)DNA 文库 PCR 扩增条件优化第27-28页
     ·AFB_1和 AFB_2孵育洗剂条件的优化第28-29页
     ·黄曲霉毒素 B_1和 B_2十轮筛选所得到的 ssDNA 聚丙烯酰胺凝胶电泳图第29-30页
   ·黄曲霉毒素 B_1和 B_2核酸适配子的克隆测序及分析第30-38页
     ·黄曲霉毒素 B_1核酸适配子一级结构同源性分析和二级结构分析第30-32页
     ·黄曲霉毒素 B_2核酸适配子的一级结构同源性分析和二级结构分析第32-34页
     ·黄曲霉毒素 B_1和 B_2核酸适配子的亲和性第34-37页
     ·黄曲霉毒素 B_1及 B_2核酸适配子的特异性第37-38页
   ·黄曲霉毒素 B_1和 B_2核酸适配子的应用第38-41页
     ·亲和素包被磁珠的制备与表征第38页
     ·亲和素浓度的优化第38-39页
     ·亲和素包被的磁珠与生物素标记的适配子的连接及条件优化第39页
     ·黄曲霉毒素 B_1和 B_2适配子检测方法的建立第39-41页
   ·基于纳米金标记-适配体识别的伏马菌素 B_1可视化检测新方法第41-47页
     ·NaCl 浓度的优化及杂交条件的选择第41-43页
     ·FB_1的定量检测第43-45页
     ·啤酒中伏马菌素 FB_1的加标回收第45-47页
主要结论第47-48页
展望第48-49页
致谢第49-50页
参考文献第50-54页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第54页

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