| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-37页 |
| 1.1 VBNC状态食源性致病菌概述 | 第13-16页 |
| 1.2 VBNC状态细菌的生物学特性 | 第16-19页 |
| 1.2.1 细胞形态 | 第16-17页 |
| 1.2.2 代谢活动特征 | 第17页 |
| 1.2.3 毒力及致病性 | 第17-18页 |
| 1.2.4 环境胁迫因素的耐受性 | 第18-19页 |
| 1.3 VBNC状态食源性致病菌的诱导因素 | 第19-22页 |
| 1.3.1 物理因素 | 第19-21页 |
| 1.3.2 化学因素 | 第21-22页 |
| 1.4 VBNC状态食源性致病菌的检测方法 | 第22-28页 |
| 1.4.1 光学方法 | 第22-24页 |
| 1.4.2 免疫学方法 | 第24-25页 |
| 1.4.3 分子生物学方法 | 第25-28页 |
| 1.4.4 其他方法 | 第28页 |
| 1.5 VBNC状态食源性致病菌的复苏 | 第28-29页 |
| 1.6 VBNC状态细胞的相关机制 | 第29-33页 |
| 1.6.1 VBNC状态细胞的形成机制 | 第29-31页 |
| 1.6.2 VBNC状态细胞的复苏机制 | 第31-33页 |
| 1.7 转录组学分析简介 | 第33-34页 |
| 1.8 本课题研究的目的与意义 | 第34-37页 |
| 1.8.1 立项依据及意义 | 第34-35页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第35-37页 |
| 第二章 速冻牛肉丸中VBNC状态E.coli O157:H7 的诱导 | 第37-49页 |
| 2.1 材料与设备 | 第37-39页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第37-39页 |
| 2.1.2 试剂配制 | 第39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-42页 |
| 2.2.1 菌株的培养 | 第39-40页 |
| 2.2.2 E.coli O157:H7 生长曲线的测定 | 第40页 |
| 2.2.3 速冻牛肉丸低温诱导方法的建立 | 第40-41页 |
| 2.2.4 大肠杆菌O157:H7可培养数的测定 | 第41页 |
| 2.2.5 吖啶橙荧光显微镜法对E.coli O157:H7 的测定 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 2.3.1 大肠杆菌O157:H7 生长曲线的测定 | 第42-43页 |
| 2.3.2 低温诱导大肠杆菌O157:H7可培养数的测定 | 第43-44页 |
| 2.3.3 不可培养状态E.coli O157:H7 的活菌验证与测定 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 PMA-PCR快速检测方法的建立与应用 | 第49-65页 |
| 3.1 材料与设备 | 第49-52页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第49-51页 |
| 3.1.2 试剂的配制 | 第51-52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-56页 |
| 3.2.1 PMA-PCR检测体系的建立 | 第52-54页 |
| 3.2.2 PCR对E.coli O157:H7的特异性实验 | 第54页 |
| 3.2.3 PCR检出限的确定 | 第54页 |
| 3.2.4 PMA-PCR反应体系在速冻牛肉丸中的应用 | 第54-55页 |
| 3.2.5 PMA-PCR对速冻牛肉丸中混合活死菌的检测 | 第55页 |
| 3.2.6 PMA-PCR对速冻牛肉丸中VBNC状态E.coli O157:H7 的检测 | 第55页 |
| 3.2.7 PCR产物条带的亮度测量 | 第55-56页 |
| 3.3 结果与分析 | 第56-61页 |
| 3.3.2 PCR检出限的确定 | 第56-58页 |
| 3.3.3 LB培养液中活菌与死菌PMA使用浓度的确定 | 第58页 |
| 3.3.4 PMA-PCR反应体系在速冻牛肉丸中的应用 | 第58-59页 |
| 3.3.5 PMA-PCR对速冻牛肉丸中混合活死菌及不可培养状态菌的检测 | 第59-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 3.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第四章 转录组学分析低温诱导E.coli O157:H7 形成VBNC状态的可能机制 | 第65-95页 |
| 4.1 材料与设备 | 第65-66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 4.2.1 菌株活化 | 第66-67页 |
| 4.2.2 菌液的制备 | 第67页 |
| 4.2.3 细菌总RNA的提取 | 第67页 |
| 4.2.4 RNA-seq测序文库的构建 | 第67-68页 |
| 4.2.5 RNA-seq的高通量测序 | 第68-69页 |
| 4.2.6 转录组数据分析 | 第69-70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-89页 |
| 4.3.1 细菌总RNA的提取 | 第70-71页 |
| 4.3.2 E.coli O157:H7 转录组数据分析 | 第71-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-93页 |
| 4.5 本章小结 | 第93-95页 |
| 全文总结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
| 攻读硕士期间取得的成果和参加的项目 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
