| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 藏红花酸 | 第9-11页 |
| 1.1.1 藏红花 | 第9页 |
| 1.1.2 藏红花酸的简介 | 第9-10页 |
| 1.1.3 藏红花酸的药理作用 | 第10-11页 |
| 1.2 藏红花酸的生物合成 | 第11-14页 |
| 1.2.1 研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2.2 酶来源的组合筛选 | 第12-13页 |
| 1.2.3 竞争路径的敲除 | 第13页 |
| 1.2.4 蛋白融合策略 | 第13-14页 |
| 1.2.5 发酵条件的优化 | 第14页 |
| 1.3 类胡萝卜素裂解酶(CCD)的相关研究 | 第14-17页 |
| 1.3.1 CCD的简介及分类 | 第14页 |
| 1.3.2 植物CCD的分类 | 第14-16页 |
| 1.3.3 CCD的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.4 CCD的定位 | 第17页 |
| 1.4 本研究的内容及意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-33页 |
| 2.1.1 实验质粒 | 第19-23页 |
| 2.1.2 实验质粒与菌株 | 第23-29页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第29-30页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.5 实验试剂 | 第31-33页 |
| 2.2 分子操作技术 | 第33-40页 |
| 2.2.1 目的片段的扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.2 普通DNA产物琼脂糖凝胶回收 | 第34-35页 |
| 2.2.3 酶切连接 | 第35-36页 |
| 2.2.4 大肠杆菌转化方法 | 第36-37页 |
| 2.2.5 大肠杆菌转化子的验证 | 第37-38页 |
| 2.2.6 大肠杆菌质粒提取 | 第38页 |
| 2.2.7 酿酒酵母转化方法 | 第38-39页 |
| 2.2.8 5-氟乳清酸(5-FOA)敲除URA法 | 第39页 |
| 2.2.9 酿酒酵母转化子验证 | 第39页 |
| 2.2.10 酿酒酵母质粒提取 | 第39-40页 |
| 2.2.11 酿酒酵母基因组提取法 | 第40页 |
| 2.3 摇瓶发酵培养方法 | 第40页 |
| 2.4 产物的提取及检测方法 | 第40-42页 |
| 2.4.1 产物提取试剂的配制 | 第40-41页 |
| 2.4.2 玉米黄质的提取及检测方法 | 第41页 |
| 2.4.3 藏红花酸的提取及检测方法 | 第41-42页 |
| 2.5 生物信息学和结构分析 | 第42-43页 |
| 第三章 探究藏红花酸合成路径、表达水平及底盘之间的适配性 | 第43-61页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 CrtZ与CCD的组合设计 | 第44-50页 |
| 3.2.1 外源基因模块的构建 | 第45-48页 |
| 3.2.2 生产菌株的构建 | 第48页 |
| 3.2.3 最优CrtZ/CCD组合的筛选 | 第48-50页 |
| 3.3 ALD基因来源的适配性 | 第50-54页 |
| 3.3.1 ALD基因表达盒的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.2 生产菌株的构建 | 第52-53页 |
| 3.3.3 ALD基因来源的筛选 | 第53-54页 |
| 3.4 基因表达水平的调节 | 第54-55页 |
| 3.4.1 生产菌株的构建 | 第54页 |
| 3.4.2 CCD2/ALD的多拷贝表达对藏红花酸产量的影响 | 第54-55页 |
| 3.5 底盘细胞的改造 | 第55-61页 |
| 3.5.1 基因敲除盒的构建 | 第56-57页 |
| 3.5.2 生产菌株的构建 | 第57-58页 |
| 3.5.3 竞争路径的敲除对藏红花酸产量的影响 | 第58-61页 |
| 第四章 探究类胡萝卜素裂解酶(CCD)的性质 | 第61-75页 |
| 4.1 引言 | 第61-62页 |
| 4.2 CCD的进化分析 | 第62-63页 |
| 4.3 CCD的结构分析 | 第63-67页 |
| 4.3.1 ZCD1、ZCD、CCD4b1的序列比对及同源建模 | 第63-65页 |
| 4.3.2 CCD2、CCD3的序列比对及同源建模 | 第65-67页 |
| 4.4 辅因子Fe的影响 | 第67-68页 |
| 4.5 CrtZ与CCD的融合表达 | 第68-75页 |
| 4.5.1 融合蛋白基因组整合菌株的构建 | 第69-70页 |
| 4.5.2 融合蛋白质粒表达菌株的构建 | 第70-71页 |
| 4.5.3 CrtZ-CCD融合基因的表达 | 第71-73页 |
| 4.5.4 CrtZ-CCD融合基因的过表达 | 第73-75页 |
| 第五章 藏红花酸生产菌株的发酵培养基优化 | 第75-83页 |
| 5.1 引言 | 第75页 |
| 5.2 Plackett-Burman设计确定重要影响因素 | 第75-78页 |
| 5.3 最速上升实验 | 第78页 |
| 5.4 Box-Behnke响应面优化实验 | 第78-83页 |
| 第六章 结论与展望 | 第83-87页 |
| 6.1 结论 | 第83-84页 |
| 6.2 展望 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 附录A | 第97-111页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
