| 摘要 | 第12-17页 |
| Abstract | 第17-21页 |
| 缩略词表 | 第22-24页 |
| 第一章 绪论 | 第24-42页 |
| 1.1 乳酸菌的抗氧化特性 | 第24-28页 |
| 1.1.1 益生乳酸细菌概述 | 第24-25页 |
| 1.1.2 乳酸菌抗氧化作用模式 | 第25-26页 |
| 1.1.3 乳酸菌抗氧化活性的评价方法 | 第26-28页 |
| 1.2 乳酸菌对细胞抗氧化作用的研究 | 第28-32页 |
| 1.2.1 细胞氧化还原作用机理 | 第28-29页 |
| 1.2.2 乳酸菌调节细胞的抗氧化作用 | 第29-30页 |
| 1.2.3 乳酸菌调节肠道上皮细胞炎症响应的作用 | 第30-32页 |
| 1.3 嗜热链球菌的抗氧化机制 | 第32-35页 |
| 1.3.1 嗜热链球菌概述 | 第32-33页 |
| 1.3.2 嗜热链球菌的抗氧化系统 | 第33-34页 |
| 1.3.3 过氧化物酶EfeB及其作用机制 | 第34页 |
| 1.3.4 谷胱甘肽在嗜热链球菌中的生物合成 | 第34-35页 |
| 1.4 嗜热链球菌抗氧胁迫的调控机制 | 第35-39页 |
| 1.4.1 CodY转录因子的调控机制 | 第35-36页 |
| 1.4.2 二组分转录调控系统 | 第36-39页 |
| 1.5 本文的立题依据及研究内容 | 第39-42页 |
| 第二章 嗜热链球菌抗氧化特性的体外评价 | 第42-58页 |
| 2.1 材料 | 第42-45页 |
| 2.1.1 菌株 | 第42-43页 |
| 2.1.2 培养基及试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第44-45页 |
| 2.2 方法 | 第45-47页 |
| 2.2.1 菌悬液及细胞提取物的制备 | 第45页 |
| 2.2.2 抗坏血酸自氧化抑制率测定 | 第45页 |
| 2.2.3 脂质过氧化抑制率测定 | 第45-46页 |
| 2.2.4 DPPH自由基清除活性测定 | 第46页 |
| 2.2.5 胞内SOD活性测定 | 第46页 |
| 2.2.6 SOD活性胶蛋白电泳 | 第46-47页 |
| 2.2.7 O_2~-清除活性测定 | 第47页 |
| 2.3 结果 | 第47-56页 |
| 2.3.1 嗜热链球菌抑制抗坏血酸自氧化的能力 | 第47-50页 |
| 2.3.2 嗜热链球菌对DPPH自由基的清除能力 | 第50-51页 |
| 2.3.3 嗜热链球菌O_2~-清除活性的分析 | 第51-52页 |
| 2.3.4 嗜热链球菌的SOD活性 | 第52-55页 |
| 2.3.5 嗜热链球菌抑制脂质过氧化能力的分析 | 第55-56页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 S.thermophilus CGMCC 7.179对HT-29细胞氧化应激的保护作用 | 第58-76页 |
| 3.1 材料 | 第59-60页 |
| 3.1.1 菌株及细胞株 | 第59页 |
| 3.1.2 培养基及试剂 | 第59-60页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第60页 |
| 3.2 方法 | 第60-64页 |
| 3.2.1 过氧化氢胁迫实验 | 第60-61页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第61页 |
| 3.2.3 细菌-细胞共培养样品的制备 | 第61-62页 |
| 3.2.4 细胞胞内ROS含量测定 | 第62页 |
| 3.2.5 细胞裂解液的制备 | 第62页 |
| 3.2.6 细胞胞内抗氧化酶活性的测定 | 第62-63页 |
| 3.2.7 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第63页 |
| 3.2.8 抗氧化酶基因转录水平测定 | 第63-64页 |
| 3.2.9 统计学分析 | 第64页 |
| 3.3 结果 | 第64-72页 |
| 3.3.1 EfeB抵御氧化压力的作用 | 第64-65页 |
| 3.3.2 S.thermophilus CGMCC 7.179减弱HT-29细胞内ROS水平 | 第65-67页 |
| 3.3.3 S.thermophilus CGMCC 7.179对胞内抗氧化酶活性的作用 | 第67-69页 |
| 3.3.4 S.thermophilus CGMCC 7.179对细胞Nrf2蛋白表达的作用 | 第69-71页 |
| 3.3.5 S.thermophilus CGMCC 7.179对Nrf2相关抗氧化酶基因转录水平的作用 | 第71-72页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第72-76页 |
| 第四章 过氧化物酶EfeB对HT-29细胞抗氧化作用的研究 | 第76-88页 |
| 4.1 材料 | 第76-78页 |
| 4.1.1 菌株、质粒及细胞株 | 第76-77页 |
| 4.1.2 培养基及试剂 | 第77页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第77-78页 |
| 4.2 方法 | 第78-80页 |
| 4.2.1 EfeB蛋白的诱导表达及纯化 | 第78页 |
| 4.2.2 EfeB蛋白的酶活测定 | 第78-79页 |
| 4.2.3 EfeB蛋白的梯度稀释 | 第79页 |
| 4.2.4 细胞氧化压力耐受的测定 | 第79页 |
| 4.2.5 细胞胞内SOD活性测定 | 第79-80页 |
| 4.2.6 蛋白免疫印迹 | 第80页 |
| 4.2.7 抗氧还酶基因的转录水平测定 | 第80页 |
| 4.3 结果 | 第80-86页 |
| 4.3.1 EfeB蛋白的酶活检验 | 第80-81页 |
| 4.3.2 EfeB蛋白对HT-29细胞氧化压力耐受的作用 | 第81-83页 |
| 4.3.3 EfeB蛋白对细胞内SOD活性的影响 | 第83-84页 |
| 4.3.4 EfeB蛋白对细胞内Nrf2表达的影响 | 第84-85页 |
| 4.3.5 EfeB蛋白对细胞抗氧化酶基因转录水平的影响 | 第85-86页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第86-88页 |
| 第五章 谷胱甘肽生物合成对S.thermophilus CGMCC 7.1 79抗炎作用的研究 | 第88-104页 |
| 5.1 材料 | 第88-90页 |
| 5.1.1 菌株及细胞株 | 第88-89页 |
| 5.1.2 培养基及试剂 | 第89-90页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第90页 |
| 5.2 方法 | 第90-94页 |
| 5.2.1 嗜热链球菌基因组DNA的粗提取 | 第90-91页 |
| 5.2.2 嗜热链球菌感受态制备及电转化 | 第91页 |
| 5.2.3 gshF突变株的构建 | 第91-92页 |
| 5.2.4 GSH含量的测定 | 第92页 |
| 5.2.5 过氧化氢胁迫实验 | 第92页 |
| 5.2.6 细胞氧化压力耐受的测定 | 第92-93页 |
| 5.2.7 胞内抗氧化酶活性测定 | 第93页 |
| 5.2.8 抗氧化酶基因转录水平的分析 | 第93页 |
| 5.2.9 抗炎实验样品制备 | 第93页 |
| 5.2.10 促炎因子转录水平的分析 | 第93-94页 |
| 5.2.11 IL-8表达水平分析 | 第94页 |
| 5.3 结果 | 第94-101页 |
| 5.3.1 GshF抵御氧胁迫的作用 | 第94-95页 |
| 5.3.2 谷胱甘肽对HT-29细胞氧化压力耐受的作用 | 第95-96页 |
| 5.3.3 谷胱甘肽合成对HT-29细胞内抗氧化酶活性的作用 | 第96-98页 |
| 5.3.4 谷胱甘肽合成对抗氧化酶基因表达的作用 | 第98-99页 |
| 5.3.5 谷胱甘肽合成对沙门氏菌感染引发的炎症反应的抑制作用 | 第99-101页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第101-104页 |
| 第六章 全局转录因子CodY对S.thermophilus ST2017氧压力响应的调控机制 | 第104-124页 |
| 6.1 材料 | 第105-106页 |
| 6.1.1 菌株和质粒 | 第105页 |
| 6.1.2 培养基及试剂 | 第105-106页 |
| 6.1.3 仪器设备 | 第106页 |
| 6.2 方法 | 第106-110页 |
| 6.2.1 过氧化氢胁迫实验 | 第106-107页 |
| 6.2.2 生物信息学分析 | 第107页 |
| 6.2.3 RT-qPCR分析 | 第107页 |
| 6.2.4 谷胱甘肽含量测定 | 第107页 |
| 6.2.5 CodY蛋白的表达纯化 | 第107-108页 |
| 6.2.6 凝胶阻滞电泳(EMSA) | 第108页 |
| 6.2.7 covR突变株的构建 | 第108-109页 |
| 6.2.8 生长曲线测定 | 第109页 |
| 6.2.9 抗氧胁迫能力的测定 | 第109页 |
| 6.2.10 转录组样品的制备 | 第109-110页 |
| 6.2.11 嗜热链球菌基因组DNA提取 | 第110页 |
| 6.3 结果 | 第110-121页 |
| 6.3.1 CodY_(st)对菌株氧化耐受的作用 | 第110-111页 |
| 6.3.2 转录组及gshF的定量分析 | 第111-112页 |
| 6.3.3 S.thermophilus ST2017及codY_(st)缺失突变株胞内谷胱甘肽含量分析 | 第112-113页 |
| 6.3.4 谷胱甘肽对S.thermophilus ST2017抗氧胁迫的作用 | 第113-114页 |
| 6.3.5 CodY_(st)与gshF启动子的体外结合 | 第114-115页 |
| 6.3.6 CodY_(st)对covR的转录调控作用 | 第115-116页 |
| 6.3.7 covR突变株的构建及生长情况分析 | 第116-117页 |
| 6.3.8 CovR对氧胁迫的响应 | 第117-119页 |
| 6.3.10 CovR的转录组学分析 | 第119-121页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第121-124页 |
| 全文总结与展望 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-141页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第141-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 外文写作 | 第143-144页 |
| 附件 | 第144页 |
