| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 单核增生李斯特菌研究进展 | 第9-15页 |
| 1.1.1 单增李斯特菌生物学特性 | 第9-10页 |
| 1.1.2 LM食物污染情况 | 第10页 |
| 1.1.3 单增李斯特菌的致病性 | 第10-11页 |
| 1.1.4 LM检测技术现状及进展 | 第11-15页 |
| 1.2 免疫磁珠技术 | 第15-18页 |
| 1.2.1 免疫磁珠的结构和制备 | 第15-16页 |
| 1.2.2 免疫磁珠分离原理 | 第16页 |
| 1.2.3 免疫磁珠技术的应用 | 第16-18页 |
| 1.3 本文研究意义与方法 | 第18-19页 |
| 第二章 单增李斯特菌多克隆抗体的制备 | 第19-33页 |
| 摘要 | 第19页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第19-24页 |
| 2.1.1 试剂与材料 | 第19-22页 |
| 2.1.2 主要试剂的配制 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 免疫原的制备 | 第24页 |
| 2.2.2 实验动物免疫 | 第24-25页 |
| 2.2.3 兔抗血清效价的测定 | 第25页 |
| 2.2.4 兔抗血清的纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.5 抗体评价 | 第26-28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-32页 |
| 2.3.1 免疫应答曲线 | 第28页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE电泳分析纯化多克隆抗体 | 第28-29页 |
| 2.3.3 免疫斑点杂交法鉴定抗体特异性 | 第29-31页 |
| 2.3.4 单增李斯特免疫多抗的western blot检测结果 | 第31页 |
| 2.3.5 免疫胶体金电镜观察结果 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 免疫磁珠富集单核增生李斯特氏菌方法的建立 | 第33-57页 |
| 摘要 | 第33-34页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-37页 |
| 3.1.1 试剂与材料 | 第34-36页 |
| 3.1.2 主要试剂的配制 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-43页 |
| 3.2.1 磁珠性状分析 | 第37页 |
| 3.2.2 直接法免疫磁珠制备方法 | 第37页 |
| 3.2.3 链霉亲和素(SA)的表达与复性 | 第37-38页 |
| 3.2.4 长链生物素连接LM多克隆抗体 | 第38页 |
| 3.2.5 链霉亲和素-生物素体系介导的免疫磁珠制备方法 | 第38页 |
| 3.2.6 磁珠偶联方式、粒径以及磁珠用量对捕获效率的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.7 磁珠偶联链酶亲和素量的确定 | 第39页 |
| 3.2.8 比较不同抗体制备的免疫磁珠捕获效果 | 第39页 |
| 3.2.9 抗体不同添加量的确定 | 第39-40页 |
| 3.2.10 不同封闭剂的比较 | 第40页 |
| 3.2.11 IMBs及捕获IMBs-LM复合物观察表征 | 第40页 |
| 3.2.12 免疫磁珠与菌液最佳反应时间的确定 | 第40-41页 |
| 3.2.13 磁分离时间的确定 | 第41页 |
| 3.2.14 不同磁强度的比较 | 第41页 |
| 3.2.15 免疫磁珠捕获不同菌浓度的比较 | 第41页 |
| 3.2.16 免疫磁珠捕获不同培养方式LM的比较 | 第41-42页 |
| 3.2.17 评价免疫磁珠特异性 | 第42页 |
| 3.2.18 杂菌对免疫磁珠捕获效率的影响 | 第42页 |
| 3.2.19 免疫磁珠保存实验 | 第42-43页 |
| 3.2.20 免疫磁珠在牛奶中富集 | 第43页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第43-55页 |
| 3.3.1 链霉亲和素表达与复性 | 第43页 |
| 3.3.2 抗体与磁珠偶联方法比较 | 第43-44页 |
| 3.3.3 磁珠表征 | 第44-46页 |
| 3.3.4 偶联抗体不同添加量结果分析 | 第46页 |
| 3.3.5 不同抗体制备的免疫磁珠捕获效果 | 第46-47页 |
| 3.3.6 链酶亲和素磁珠优化 | 第47-48页 |
| 3.3.7 磁珠粒径对菌捕获能力的影响 | 第48页 |
| 3.3.8 LM与IMBs结合观察 | 第48-49页 |
| 3.3.9 不同封闭剂比较 | 第49-50页 |
| 3.3.10 免疫反应时间对捕获效率的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.11 磁分离时间对免疫磁捕获效率的影响 | 第51页 |
| 3.3.12 不同磁强度比较 | 第51-52页 |
| 3.3.13 免疫磁珠捕获不同菌浓度结果分析 | 第52页 |
| 3.3.14 免疫磁珠特异性 | 第52-53页 |
| 3.3.15 杂菌存在下对免疫磁珠捕获目标菌的影响 | 第53页 |
| 3.3.16 对不同培养条件所得菌捕获效率结果分析 | 第53-54页 |
| 3.2.17 免疫磁珠保存实验 | 第54页 |
| 3.3.18 在实际样本中的捕获 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 结论与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 结论 | 第57页 |
| 4.1.1 LM多克隆抗体的制备 | 第57页 |
| 4.1.2 纳米免疫磁珠快速特异性富集LM的建立 | 第57页 |
| 4.2 展望 | 第57-59页 |
| 4.2.1 LM抗体的制备 | 第57-58页 |
| 4.2.2 大体系纳米免疫磁珠高效富集LM方法建立 | 第58页 |
| 4.2.3 食品样品中的应用 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 个人介绍 | 第66页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第66页 |
